细胞增殖曲线_卡拉胶寡糖对皮肤成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响

海洋中蕴含丰富的自然资源，随着海洋生物学的发展，海洋生物活性物质越来越受到关注。卡拉胶寡糖是由卡拉胶降解而来的一种酸性硫酸寡糖，根据半乳糖中是否含有内醚以及半乳糖上硫酸基的数量和连接位置不同，分为 κ － 、μ － 、ι － 、θ － 、λ － 、ε － 、ν － 七种类型。卡拉胶寡糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗菌、抗病毒等生物学活性，同时具有对放射性损伤的保护作用。

本文以 κ － 卡拉胶寡糖和小鼠皮肤成纤维细胞为研究材料，研究 κ － 卡拉胶寡糖可能在皮肤中起到抗衰老的作用及其机理，为开发利用功能性寡糖提供依据。

用 0. 25%的胰酶消化单层贴壁成纤维细胞，DMEM/F12 培养液配制成单细胞悬液，以 1 ×10 4个/孔接种于 96 孔培养板中。培养 24h 后，弃去培养上清液，加入 0. 1mL 不同浓度的 κ － 卡拉胶寡糖，设置空白对照组。分别在 0d、1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d 消化细胞进行细胞计数，每组6 个复孔。隔天给未计数的细胞换液，并加药。以培养时间为横轴，细胞数为纵轴绘制生长曲线。

经 κ － 卡拉胶寡糖作用 2d 后，12. 5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL 和 100μg/mL 浓度组成纤维细胞增殖活跃，直至作用后第6d 达平台期。从生长曲线来看各浓度 κ － 卡拉胶寡糖对小鼠皮肤成纤维细胞均有一定促进增殖作用。其中，以100μg/mL κ － 卡拉胶寡糖组最为明显，细胞提前进入平台期，细胞倍增时间由对照组的 3. 49 天减少至 3. 00 天。见图 1。

κ － 卡拉胶寡糖在 12. 5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL 和 100μg/mL 时均有明显促进成纤维细胞增殖的作用。随着药物浓度增高，促进增殖作用更加明显，具有剂量依赖性。详见图 2。

κ － 卡拉胶寡糖对小鼠皮肤成纤维细胞培养基中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白含量增高明显，尤其是明显促进Ⅲ型胶原蛋白分泌，各组 P ＜ 0. 05。详见表 1。

皮肤老化按其成因分为内源性和外源性。内源性皮肤老化主要是指随着年龄增长而出现的全身皮肤松弛和皮纹加深; 通过环境因素或者生活方式的原因产生的损害积累，属于外源性老化。内源性和外源性皮肤老化均表现为真皮组织的显著变化。

成纤维细胞是皮肤真皮中最主要的细胞成分，在合成分泌纤维和细胞外基质中扮演着重要的角色。成纤维细胞既合成和分泌胶原蛋白，弹性蛋白，生成胶原纤维、网状纤维和弹性纤维，也合成和分泌糖胺多糖和糖蛋白等基质成分。皮肤老化与成纤维细胞数量减少、合成功能下降或异常有关。另外，衰老皮肤在组织学上一个比较突出的表现是细胞质基质中胶原的减少，所以防治皮肤衰老目的就是增加成纤维细胞数量，恢复细胞外基质的正常结构，增加胶原含量。

κ － 卡拉胶寡糖具有多种生物活性，本研究中，12. 5μg/mL 和 25μg/mL κ － 卡拉胶寡糖对小鼠皮肤成纤维细胞具有显著促进增殖作用 (P ＜0. 05)，50μg/mL 和 100μg/mL κ － 卡拉胶寡糖对小鼠皮肤成纤维细胞具有极显著促进增殖作用(P ＜0. 01)，且促增殖作用与药物作用浓度呈正比。100μg/mL 的浓度下，在加药后第二天显现出明显促进成纤维细胞增殖的迹象，并使细胞提前进入平台期，细胞倍增时间减少，加速新陈代谢。

另外，κ － 卡拉胶寡糖对小鼠皮肤成纤维细胞分泌Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白含量影响明显，具有显著促进作用 (P ＜ 0. 05)。其中，在 12. 5μg/mL 100μg/mL 范围内，κ － 卡拉胶寡糖可促进成纤维细胞生长，并呈量效依赖，但 κ － 卡拉胶寡糖对小鼠皮肤成纤维细胞分泌Ⅲ型胶原蛋白含量的影响，并未呈现与细胞增殖时相应的量效关系。说明低浓度 κ － 卡拉胶寡糖就可显著促进Ⅲ型胶原蛋白的分泌，在较高浓度时 κ － 卡拉胶寡糖可能主要促进细胞增殖，而在相同的时间里与低浓度处理组相比胶原蛋白的分泌相对较少。其促进胶原分泌的机理有待进一步研究。以上结果显示，κ － 卡拉胶寡糖具有促进小鼠皮肤成纤维细胞增殖及胶原蛋白的分泌的作用。

文章来源：《κ － 卡拉胶寡糖对小鼠皮肤成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响》

作者：王天琦1 ，吴海歌 1，2*，姚子昂1

(1. 大连大学生命科学与技术学院，2. 中国科学院大连物理化学研究所 )