hyperion高光谱参数_内部推扫式高光谱显微镜的光学设计和实验室测试

内部推扫式高光谱显微镜的光学设计和实验室测试

摘要：高光谱成像技术是一种新兴的医学应用技术，特别是在疾病早期诊断和生物医学研究中基于其独特的光谱特征。本文设计了一种适用于多种医学应用的基于棱镜-光栅-棱镜的高光谱显微技术。在400nm到800nm之间的光谱范围通过256个光谱通道进行采样，全光谱和全视场的调制传递函数(MTF)值接近衍射极限，smile不到一个像素的6.4%，keystone(smile和这个词是病理学专业词汇吧)小于一个像素的1.6%。与此同时，高光谱显微技术采用内部推扫技术，具有结构紧凑、便携性好等优点。光谱成像结果表明，这种内部推扫高光谱显微镜为病理学家在自动检测肿瘤组织的病理切片和早期疾病诊断中拥有巨大潜力。

关键词:成像光谱仪;光学系统设计;高光谱显微术;医学和生物成像。

1.介绍

高光谱成像(HSI)又称成像光谱技术，是指将常规成像技术与光谱技术相结合，获取物体空间和光谱信息的技术。这项新技术最初是由遥感技术发展而来的。这种技术的重要优势之一是,它可以获得图像中每个像素的反射、吸收、传输或荧光光谱，用于检测无法用传统灰色或彩色成像方法识别的对象的生物化学变化。在生物医学领域，高光谱显微技术是HSI的主要研究方向。

高光谱显微镜的成像方法主要有声光可调谐滤光片(AOTF)和液晶可调谐滤光片(LCTF)两种。但与这两种技术相关的一些限制已经被报道，如有限的光谱范围(AOTFs，LCTFs)，低吞吐量(AOTFs，LCTFs)，波长调谐时的图像偏移(AOTFs)。最近，另外两种新的快照光谱成像方法被开发用于高光谱显微镜(HSM)。这些技术包括图像映射光谱(IMS)和计算机断层成像光谱(CTIS)。然而，这些技术有一些局限性，包括空间分辨率(IMS, CTIS)和光谱范围(IMS)。另外，CTIS需要复杂的计算重构，IMS需要一个精确的图像映射器(IMS的核心要素)，并且二者的制造和装配都比较困难。

本文以棱镜-光栅-棱镜成像光谱仪为基础，设计了一种结构紧凑的内部推扫式高光谱显微成像系统。其具有较高的光谱分辨率和空间分辨率。波长范围很广，从400nm到800nm。在波长范围内不存在图像漂移，不需要复杂的计算重构。棱镜-光栅-棱镜(PGP)成像光谱仪的调制传递函数(MTF)值接近于衍射极限。smile不到一个像素的6.4%，keystone小于一个像素的1.6%。实验结果表明，高光谱显微技术在生物医学研究、疾病诊断、肿瘤精确切除等方面具有巨大的应用潜力。

2.工作原理

高光谱显微镜的光学布局如图1所示，它主要由五部分组成:显微镜、棱镜-光栅-棱镜成像光谱仪、电荷耦合器件(CCD)照相机、内部推扫装置和计算机。显微镜的物镜使样品在棱镜-光栅-棱镜成像光谱仪的狭缝处聚焦。在入射狭缝的帮助下，分光计只允许样品的一条窄带通过。来自物体窄带的光线根据PGP色散单元进行分散。内部推扫装置由精密电子控制移动台和控制器组成。在内部推扫装置上安装PGP成像光谱仪，以获得另一空间维度的图像。

该显微镜配备平场复消色差物镜(40×，N.A.=0.65)，该物镜是上海Quqian光学仪器公司产品。样品放在显微镜台上，用一个50w的卤素灯照明。本样机的CCD相机有1384×1032个像数数，像素大小为6.45×6.45μm。摄像机由PC通过USB3.0控制。

表1. 高光谱显微镜的设计参数

高光谱显微术的空间分辨率为0.7um，可用于生物医学研究和早期疾病诊断的组织结构分析。此外，高光谱显微镜的频谱为1.6nm，这对于区分组织特征非常重要。高光谱显微镜的设计参数如表1所示。

3.PGP成像光谱仪光学设计

PGP成像光谱仪在高光谱显微技术中起着关键作用，它由四个主要部分组成：入射狭缝、准直透镜、PGP分散元件和聚焦透镜。准直透镜用于对进入分散PGP单元的光进行准直，并且狭缝安装在准直透镜的成像平面上。然后PGP元件将准直光分散到聚焦透镜上，最后由聚焦透镜将光聚焦到CCD相机的探测器表面。PGP成像光谱仪的放大率为1.0×，即聚焦透镜的焦距与准直透镜的焦距之比。为了得到合适的PGP成像光谱仪参数，计算过程包括三个关键步骤:(1)基于PGP色散模块原理，利用Matlab软件对棱镜的顶角和光栅的线数进行初始化计算；(2)根据光线追迹软件ZEMAX，在保证高成像质量的基础上，优化棱镜和光栅的初始参数，低smile和keystone；(3)确定了棱镜和光栅的合理参数后。PGP成像光谱仪的最终优化参数如表2所示。经过优化设计，PGP成像光谱仪的光学结构如图2所示。

表2.PGP成像光谱仪的设计参数

选择以RMS模糊直径为评价函数来计算PGP成像光谱仪的合理参数。PGP成像光谱仪的最终设计结果如图3所示。很明显，光斑直径小于像素大小(6.45×6.45)。结果表明，在宽光谱范围内，像差可以同时得到校正。

图3. PGP成像光谱仪不同波长下不同视场的点列图.(a)0.4um波长下5个视场的点列图，(b)0.55um波长下5个视场的点列图，(c)0.65um波长下5个视场的点列图，(d)0.80um波长下5个视场的点列图。

图4展示了不同波长下的MTF曲线。模拟的多色MTF图表明，随着空间频率的增加，图像对比度显著降低。芯片的奈奎斯特采样分辨率为77.5cycle/mm。从图4我们可以看到全光谱的MTF值和全视场已经接近衍射极限。

图4.(彩图)PGP成像光谱仪不同波长下MTF曲线。(a)0.4um波长下5个视场的MTF曲线，(b)0.55um波长下5个视场的MTF曲线，(c)0.65um波长下5个视场的MTF曲线，(a)0.80um波长下5个视场的MTF曲线。

图5.显示不同波长的smile效果。图中显示了不同视场与理想直线的偏差，单位为不同波长下的像素间距。对成像光谱仪的要求是smile和keystone的最小化。PGP成像光谱仪在几何smile和keystone畸变方面的优越性能是非常明显的。通过优化设计，使系统的smile和keystone更小。Smile对中心视场是对称的。最大的smile出现在800nm波长处，并且小于像素的6.4%。图6.显示了不同视场下keystone的性能。最大的keystone出现在±3.35毫米的视场，并且小于像素的1.6%。

 

4.高光谱显微镜成像实验

在上面的研究基础上，制作了高光谱显微镜样机并进行了测试。PGP成像光谱仪样机的总尺寸约为150×55×45 mm。高光谱显微镜原型样机如图7所示。

为了测试该系统的空间分辨率，使用USAF 1951的分辨率测试标靶在50W卤素灯下成像。图8为以原始数据重建后的图像。图中的分辨率标靶是标准USAF 1951分辨率测试标靶中最小的。通过对这些图像的分析，可以在波长量级内分辨出空间频率。

图9为胃部的病理切片高光谱图像。图9展示的该高光谱图像的数据立方包括多张不同波长下的病理切片，其中每幅图像对应1.6nm光谱采样下的透射信号强度。图9为两个不同像素点的透射光谱功率密度归一化分布。

5.  结论

本文详细的描述和设计了一种高光谱显微镜系统。这种高光谱显微镜具有非常高的光谱分辨率和空间分辨率，测量的采样光谱由256个光谱通道组成。在奈奎斯特采样率下，全光谱和全视场的MTF值非常接近衍射极限。最后，该高光谱显微系统被用来对USAF分辨率测试标靶和胃部的病理学切片进行清晰成像。此高光谱显微技术的一个优势是它对不同组织类型的光谱成分变化在空间和频谱上的验证能力。因此，实验结果表明，高光谱显微系统是一种很有潜力的生物医学研究设备，可以帮助病理学家在短时间内自动评估许多组织切片。

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