Science: 快速眼动揭示睡眠中发生的认知过程

自从快速眼动睡眠(REM)被发现以来，这一睡眠阶段的眼动特征一直难以捉摸。它们是揭示了梦境虚拟环境中的注视转移，还是仅仅反映了随机的脑干活动?我们利用了小鼠丘脑的头部方向(HD)系统，这是一个神经元群体，它的活动报告清醒小鼠探索环境时的实际HD，而在睡眠小鼠中报告虚拟HD。我们发现，快速眼动睡眠期间快速眼球运动的方向和振幅揭示了虚拟HD中持续变化的方向和振幅。因此，快速的眼球运动揭示了快速眼动睡眠虚拟世界中的注视转移，从而为了解睡眠大脑的认知过程提供了一扇窗。

快速眼动睡眠是一种以快速眼球运动为特征的睡眠阶段。这种睡眠阶段在许多脊椎动物中都存在，并与做梦有关。的确，与在其他睡眠阶段醒来相比，在快速眼动睡眠期间被唤醒的人类受试者更有可能报告生动的梦境。这一观察结果导致了这样一种观点，即REM睡眠中快速眼球运动的本质可能与正在进行的梦的内容有关。如果是这样的话，快速的眼球运动可能代表了睡眠时大脑中发生的一些认知过程的读数。然而，对这一假设的验证却导致了相互矛盾的结果。一些最初的研究表明，受试者报告的梦的内容与醒来前立即记录的快速眼球运动的方向或频率之间存在相关性。然而，其他研究没有重现这些结果。此外，终生失明的个体在梦中没有视觉体验，但在快速眼动睡眠中却有快速眼球运动。因此，另一种假设认为，快速眼球运动可能与REM睡眠期间发生的心理过程无关，而只是反映了随机的脑干活动。

然而，大多数这些研究都是基于对人类实验对象梦的可能不准确的报告，而不是基于对快速眼动睡眠期间大脑中发生的认知过程的客观测量。因此，我们推断，通过直接监测REM睡眠期间大脑中发生的一些认知过程，我们可以了解快速眼球运动是否真的与这些过程相协调。我们决定使用鼠标的头部方向(HD)系统作为客观读数。HD细胞是存在于丘脑背侧核(ADN)中的一群神经元。当动物在环境中探索或导航时，它们的集体活动报告了动物头部沿方位角的方向。在快速眼动睡眠期间，HD细胞的群活动与实际导航过程中发生的活动相似，因此可能代表睡眠动物的内部虚拟航向。

在清醒的、行为正常的小鼠探索环境时，HD的变化伴随着眼睛向同一方向快速扫视的运动。睡眠中的老鼠也有类似的协调性吗?显然，一只睡着的老鼠保持着固定的方向。然而，假定睡眠小鼠头部内部表征的变化可能与快速眼动睡眠期间发生的快速眼动相协调。通过监测快速的眼球运动，我们可能能够揭示在睡眠大脑的虚拟世界中发生的内部方向变化。

我们用细胞外线性探针从小鼠ADN的HD细胞中记录，同时用头戴摄像机监测双眼的运动(图1A和电影S1和S2)。小鼠自由地探索一个开放场地，它们的头部由俯视图摄像机监控(图1B)。小鼠被允许进入睡眠状态，根据标准的电生理参数将其睡眠阶段确定为快速眼动或非快速眼动(动物在整个过程中有40%到52%的时间处于睡眠状态，10%的睡眠时间为快速眼动睡眠；见表S1和方法)。为了确定在REM睡眠期间，快速的眼球运动是否与头部的内部表征相协调，我们进行了三个步骤:首先，我们在清醒的小鼠中建立了视跳式眼动与从HD细胞活性解码的动物头部内部表征之间的关系(图1)。其次，我们确定了小鼠在快速眼动睡眠期间快速眼动的特性(图2)。最后，我们研究了快速眼动睡眠期间快速眼动与头部内部表征之间关系的本质(图3和图4)。

图1 扫视的方向可以预测头部转动的内部表现。(A)演示ADN慢性电生理记录的实验结构示意图，同时用摄像机监测眼睛和头部的运动。(B)露天竞技场的示意图，一只老鼠带着头戴式眼照相机和硅探头。动物的头部由一个俯视图摄像机监控。红外LED，红外发光二极管。(C)俯视图相机的一个示例帧显示在左上方，该帧的示意图显示在右上方。顶部和底部中间面板分别展示了一个CCW转弯和一个CW转弯的例子框架。箭头表示每一帧动物的方向。(D) 11例清醒小鼠ADN记录的HD细胞的调谐曲线。右边的箭头表示每个HD单元格的首选HD。HD细胞的峰值放电速率显示在右边。(E)顶部显示的是(D)中11个HD细胞放电的栅格图。中间的轨迹说明了动物的实际方向(灰色)和从HD细胞的种群活动中解码的方向(绿色)。三角形标记CCW转弯(青色)和CW转弯(紫红色)的例子帧的时间，如(C)所示。底部的痕迹说明了两只眼睛(红色和蓝色)的水平位置。垂直虚线表示跳视的开始。(F)右眼在CCW扫视前后的两张快照显示在顶部。瞳孔被一个黑圈圈住了。右图中的虚线圈标记了瞳孔的原始位置(N，鼻合角;T,颞合缝处)。红色的痕迹表示右眼在时间上的水平位置。视跃振幅被定义为视跃时眼睛水平位置的变化。绿色的痕迹说明了解码后的航向。头部转向振幅是在跳视发生前200毫秒和后200毫秒之间解码的头部变化。注意解码航向中伴随CCW扫视的CCW移位。(G)在开阔场地探索时共轭跳视振幅的汇总散点图(n = 13,778，来自6只小鼠)。在扫视过程中被解码的头部转动的幅度和符号是用颜色编码的。注意，扫视的方向与解码后的转头方向相匹配。在本图和其他图中，散点图的右上和左下象限分别代表CW和CCW运动。(H)共轭扫视振幅(双眼平均)与解码头转振幅之间的相关性。扫视振幅预测了每只老鼠(灰色线)和所有老鼠(红色线;垂直线表示标准差)。

图2 REM睡眠期间的快速眼动 (A)实验结构示意图，说明了从ADN进行的慢性电生理记录，同时用摄像机在睡眠小鼠体内监测快速眼球运动。(B)在CCW快速眼动之前(左)和之后(右)的右(上)和左(下)眼的快照。瞳孔被一个黑圈圈住了。右边的虚线圈表示瞳孔的原始位置。注意双眼移动CCW。(C) ADN在非快速眼动睡眠(NREM)、快速眼动睡眠和清醒(Wake)期间记录的局部场势(LFP)的示例谱图显示在顶部。肌电图(EMG)功率显示在中间。两个眼睛(红色和蓝色)的水平位置显示在底部。注意在快速眼动睡眠开始时眼球运动的增加。a.u,任意单位。(D)在(C)中的阴影时间间隔显示在一个扩展的时间尺度上。注意，在大多数快速的眼球运动中，两只眼睛都朝同一个方向移动。黑色和灰色的虚线表示引导的开始(至少400毫秒内没有快速的眼球运动)和跟随者的快速眼球运动。(E)所有小鼠在快速眼动睡眠期间左右快速眼动振幅的散点图(n = 6689，来自6只小鼠)。注意，大多数数据点位于左下或右上象限，表明双眼CCW和CW运动。(F)所有小鼠REM睡眠期间快速眼球运动之间的间隔分布(n = 6689，来自6只小鼠)。先导眼动用黑色表示，跟随眼动用灰色表示。

图3 快速眼动可以预测快速眼动睡眠期间的头部转动。(A)实验构型示意图(如图2A)。(B)右眼在快速眼动睡眠期间的两张快照在CCW快速眼动前后显示在顶部。红色的痕迹表示右眼在时间上的水平位置。在图1D中显示的11个HD细胞中，有3个示例HD细胞放电的栅格图显示在底部。注意在航向表示中CCW的移动伴随着CCW的快速眼球运动。(C)四个例子说明了在快速眼动睡眠期间解码的头部和眼睛位置的伴随变化。顶部的痕迹说明了两只眼睛的水平位置(红色和蓝色)和解码的航向(绿色)。垂直虚线表示眼球快速运动的开始。下图为11例HD细胞放电的栅格图(如图1D所示)。(D) CW(左)和CCW(右)主导眼运动的右(红)和左(蓝)眼的平均相对位置显示在顶部。平均解码航向(绿色)显示在底部。阴影区域是平均值的标准误差[CW的平均34迹，CCW的主要眼球运动的平均47迹]。(E) REM睡眠期间左右眼前导运动振幅散点图。在眼球运动中被解码的头部转动的幅度和符号是用颜色编码的。注意快速眼球运动的方向和被解码的头部转动的方向之间的良好匹配。(F)快速眼动睡眠中前导眼运动振幅(双眼平均)与解码头转振幅之间的相关性。对于(B)到(F)，代表小鼠与图1 C到E中的相同。(G) CW(左)和CCW(右)主导眼球运动(n = 6只小鼠)的双眼平均水平眼位的平均痕迹显示在顶部。数据集根据振幅分成五分位。基于领先的快速眼球运动的振幅，解码航向在每个五分位数中的平均轨迹显示在底部。注意，带较大振幅的引导快速眼球运动与较大的解码头部转动相一致。(H)快速眼动睡眠期间左右眼前导运动振幅的汇总散点图(n = 330，来自6只小鼠)。在眼球运动中被解码的头部转动的幅度和符号是用颜色编码的。(I)快速眼动睡眠中前导眼运动振幅与解码的头转振幅之间的相关性(n = 330，来自6只小鼠)。主导的快速眼球运动预测了每只老鼠(灰色线)以及所有老鼠(红色线;垂直线表示标准偏差)。

图4 小振幅跟随眼动代表再定位眼动。(A)在CW(左)和CCW(右)引导眼球运动之后，与第一个跟随者快速眼球运动开始对齐的水平眼球位置(两只眼睛的平均值)的示例轨迹显示在顶部。第一个跟随者在CW(左)和CCW(右)相对运动后的平均相对位置(平均超过132个CW轨迹和107个CCW轨迹)显示在中间。伴随解码的标题的平均轨迹显示在底部。注意，平均而言，第一个追随者出现的方向与前面的引导眼球运动和被解码的头部转动的方向相反。阴影区域代表平均值的标准误差。顶部面板的时间刻度覆盖了更大的间隔，以包括前面的引导眼球运动。(B)解码后的头转振幅与快速眼动振幅之间的相关性(热图)(在箱中;双眼平均;y轴)。左起第一列显示引导眼球运动(n = 330，来自6只老鼠)，第二列显示第一个跟随者(n = 239，来自6只老鼠)，第三列显示其余跟随者(n = 970，来自6只老鼠)。注意与眼动振幅的增加正相关。

我们根据清醒动物的快速动态(＞400°/s)识别出类似扫视的眼球运动。在空旷场地的探索过程中，眼扫视式眼球运动主要发生在眼颞轴上(图S1、A和B)，其中绝大多数(94.1%)眼球运动是共轭的，即两只眼睛向同一个方向移动，要么顺时针(CW)，要么逆时针(CCW)，这些眼球运动的振幅在两眼之间是相关的。在这里，我们关注的是至少振幅为2的共轭眼扫视运动，并将其简单地称为眼扫视。CW和CCW扫视与头部转动方向相同，即CW和CCW头部转动分别沿方位方向进行，这与之前的报道一致(图S1, E和F)。为了确定扫视方向与头部的内部表示之间的关系，当动物探索开阔场地时，我们分析了ADN中记录的HD细胞的种群活性(图1C和图S2)。我们记录了每只动物30到72个HD细胞(n = 6只小鼠;表S1)，这些神经元被定义为其活动受动物沿方位角方向的航向调节的神经元(图1D，见方法)。利用动物的航向和同时记录的HD细胞，我们训练了一种算法，仅根据HD细胞的放电报告航向(见方法)。在未经过训练的HD细胞活动时期进行测试时，该算法准确地解码了小鼠探索环境时的航向(图1E)，误差仅为10.2°± 3.5° (n = 6只小鼠;见图S2、C、D和方法)。扫视的方向和转头的内部表现有多匹配?我们将转头的内部表示量化为扫视前200毫秒和扫视后200毫秒解码的标题之间的差异(图1F)。绝大多数扫视(95.2±1.3%，n = 6只小鼠)发生的方向(CW或CCW)与从HD细胞活性解码的头部转动相同(图1,G和H)。因此，在清醒的动物中，扫视方向与头部转动的内部表示紧密耦合。

这种关系在快速眼动睡眠期间保持吗?为了监测快速眼动睡眠期间的快速眼球运动，我们利用了老鼠在睡眠时并不总是闭上眼睛的事实(图2、A和B和电影S2)。我们使用头戴式相机量化了睡眠动物快速眼球运动的方向和幅度。在快速眼动睡眠期间(图2C)，沿鼻颞轴发生快速眼球运动(在6只小鼠的快速眼动睡眠中共监测68分钟;图S3, A和B)，这些运动的方向，CW或CCW，在双眼之间具有良好的相关性(图2,C到E)，因此与清醒动物的眼跳相似(图S3C)，尽管振幅较小(快速眼动的平均振幅为5.1°±2.5°，眼跳的平均振幅为9.7°±3.5°)，频率较高(快速眼动的中位数间隔为267 ms，眼跳的中位数间隔为521 ms;图2F和图S1D)。

我们利用上述算法对快速眼动睡眠中头部的内部表征，即虚拟头部进行了解码。虚拟航向是从训练算法的同一组HD细胞的活动中解码出来的，不过这次是在快速眼动睡眠期间记录的。虚拟航向的变化，即虚拟转弯，发生的角速度与清醒小鼠探索竞技场时实际转弯时解码的角速度相似(图S4, A和B)，与之前的结果一致(19)。此外，在快速眼动睡眠期间，HD细胞保持着与清醒时观察到的相似的相关结构:在REM睡眠中，在清醒状态下或不同时放电的HD细胞表现出相同的模式(图S4, C和D)。为了测试快速眼球运动和虚拟头部运动之间的关系，我们首先将分析重点放在至少400毫秒内没有任何眼球运动的快速眼球运动上(图2F)，在此期间，两只眼睛向同一方向移动至少2次(即，同步快速眼球运动;见的方法)。这使得我们有足够长的基线来检测虚拟航向的潜在变化，特别是与选定的共轭快速眼球运动相关的变化。我们把这些快速的眼球运动称为前导眼球运动。引导快速眼动的方向与同时记录的虚拟旋转的方向相匹配(图3,A到C)。例如，当HD细胞的集合活动转移到CCW时，就会发生引导快速眼动的CCW(图3B)，反之亦然(图3C)。总的来说，在REM睡眠期间，前导快速眼动的方向预测了虚拟方向的变化方向，无论是在每只老鼠(图3,D到F和图S5)，还是在整个群体(图3,G和H)。此外，不仅前导眼动的方向，而且它们的振幅也提供了有关头部持续内部表现的信息:先导快速眼动的振幅越大，同时记录的虚拟转弯角度越大(图3,G到I)。

跟随前导眼动的快速眼动和动物的虚拟头部之间的关系是什么?我们把这些眼球运动称为追随者，也就是说，在另一个快速眼球运动之后不到400毫秒发生的眼球运动。上述结果(图3、D和G的上面板)表明，在主导眼动之后，眼睛的平均位置逐渐恢复到主导眼动之前的原始位置，就像重新进入眼睛一样[主导眼动400 ms后，相对于主导眼动之后的峰值位置，眼睛恢复到34.1±3.3%]。相比之下，同时解码的虚拟航向则不是这样(图3、D和G的底部面板)。如果眼球的再进入是由追随者介导的，那么这些快速眼球运动的方向应该相对于引导眼球运动的方向和虚拟航向中正在发生的变化相反。追随者的方向,领先后立即发生眼球运动(第一追随者),平均而言,相反的方向前领先眼球运动(图4和图S6A)从而相反的方向进行头部转动(图4,A和B。S6, B和C)。总的来说,追随者的方向是在虚拟朝相反的方向变化,但对追随者的一小部分(4.3%)最大的振幅(＞10°;图4B和图S6, D和E)，像引导眼球运动一样，匹配虚拟头部转向的方向。

总的来说，这些数据证明了快速眼动和快速眼动睡眠中动物头部的内部表征之间的紧密关系(图4B)。不仅引导快速眼球运动的方向预测了虚拟航向的变化方向，而且它们的振幅预测了变化的幅度。相反，跟随者的眼球运动会重新进入眼球。因此，我们的结果表明，快速的眼球运动提供了睡眠大脑中头部内部表征的读数。快速眼动睡眠和HD系统之间的协调表明，虚拟头部的移动是睡眠大脑对虚拟导航的全局协调表现的一部分，而不是HD系统中一些不相关的随机行走的结果。

在快速眼动睡眠期间发生的眼球运动是如何映射到清醒时观察到的眼球运动的?主导的快速眼球运动可能与扫视相对应，因为它们都与正在进行的头部转动的方向相匹配，无论是虚拟的还是真实的。然而，跟随者的眼球运动似乎不同于清醒动物的任何眼球运动。在清醒的小鼠中，扫视后眼睛的再进入是由图像稳定反射介导的，前庭反射和视动反射被持续的转头所参与。然而，在睡着的、不动的动物中，触发这些反射的感觉外围没有被激活。可以想象的是，在快速眼动睡眠期间，眼球的再进入运动仍然可能由前庭神经核的活动触发。这样的活动虽然独立于感觉外围，但可能是上述全球协调的虚拟导航的一部分。

自从REM睡眠阶段及其与生动梦境的关联被发现以来，REM睡眠中的快速眼动是否揭示了受试者在梦境中的注视方向一直存在争议。由于缺乏客观的测量方法来评估梦的内容，最初的研究导致了相互矛盾的结果，导致了快速眼球运动可能与睡眠大脑的认知活动无关的结论。最近，对人类患者或动物模型进行的研究表明，在快速眼动睡眠期间，由于肌肉弛缓减少而部分实现了他们的梦，这导致了对原始假设的重新评估。在这些研究中，至少有一些快速的眼球运动似乎与快速眼动睡眠期间的行为方向相协调。然而，眼和身体运动之间的协调在多大程度上是病理性或实验性弛缓的结果仍然不清楚。

通过利用啮齿类动物的HD系统和清醒动物的头部定向和眼球运动之间的相关性，我们已经建立了快速眼动睡眠中虚拟头部的变化和快速眼球运动之间的明确关系。因此，我们的研究结果表明，快速眼球运动提供了发生在快速眼动睡眠期间的内部认知过程的外部解读，即虚拟头部的变化。我们的研究结果进一步表明，在快速眼动睡眠期间，睡眠大脑中不同系统之间存在着一种全局协调的活动，这种协调可能是梦的现实和生动体验的基础。理解这种协调的神经生理机制将使我们洞察大脑生成世界模型的组织。

参考文献：A cognitive process occurring during sleep is revealed by rapid eye movements.