研究背景
人类甲状旁腺激素(PTH)及其旁分泌作用的对应物PTH相关肽(PTHrP)是调节人体内钙和磷酸盐离子稳态的主要激素。PTH作为115个残基的前体肽产生,经多次蛋白酶切割后,形成最终的84个残基的激素,作用于PTH受体1和2。研究显示,PTH的前34个氨基酸保留了激素的生物活性。
研究主旨
本文介绍了一种重组生产人PTH(1-34)的方法,使用了TEV蛋白酶进行切割,避免了对肽的修改,保留了原生N端丝氨酸的氨基形式。通过亲和和分子排阻色谱纯化后,利用多维异核NMR、圆二色性、LC/MS进行了表征。该方法与现有技术相比,更经济且通用,特别适用于需要保留N端自由胺基的肽类激素的生产。
研究特点
人类甲状旁腺激素(PTH)负责体内的钙和磷酸盐离子稳态。肽链的前34个氨基酸维持了激素的生物活性,目前用于治疗钙平衡紊乱。虽然报道了几种PTH(1-34)的重组生产方法,但大多数涉及产生修饰肽或不利副产品的切割条件。本文详细介绍了通过质粒载体产生的15N富集人PTH(1-34),该方法成本低、切割温和(保留N端丝氨酸的氨基形式)、并通过亲和和分子排阻色谱纯化。