手把手教你如何获得光学成像系统的PSF(点扩散函数)——从beads成像到处理图像的经验分享

本文分享了如何获取光学成像系统的点扩散函数(PSF)的实践经验,从购买和制备beads,到实际成像,再到结果处理。通过使用特定的插件在ImageJ上处理Z stack图像,可以计算出系统PSF,从而评估系统性能。文章还提供了插件下载和安装方法。
摘要由CSDN通过智能技术生成

首先声明:仅发表个人理解,因为我的课题研究经历更多都是自己搜罗的资源,课题组其他人都没有做这个方向的,所以如果有不对的地方,欢迎评论区讨论。

1、样品的购买和制备

我们会使用beads,俗称荧光小球,它是一个点光源,具有一定的直径,一般是0.1um,0.2um,0.5um,1um等几个直径挡位,在不同的系统下,它能成像到的点扩散函数不一样,这是反应系统质量和参数的一个标准样本。

第一步是购买beads,一般会购买ThermoFisher的荧光小球,链接如下:

荧光微球,适用于多种生物学应用领域 | Thermo Fish

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非常抱歉,我的代码中确实有误。正确的程序代码如下所示: ```matlab % 定义计算参数 lambda = 0.5e-6; % 波长(单位:m) k = 2*pi/lambda; % 波数 NA = 0.2; % 数值孔径 focal_length = 0.025; % 焦距(单位:m) D = 0.025; % 口径(单位:m) pixel_size = 6.5e-6; % 像素尺寸(单位:m) M = 100; % 图像大小 % 生成坐标系 x = ((1:M)-M/2)*pixel_size; [X,Y] = meshgrid(x,x); % 计算像面到物面的距离 Z = focal_length^2./(2*(focal_length^2+X.^2+Y.^2)); % 计算传递函数 H = zeros(M,M); for i = 1:M for j = 1:M if X(i,j)^2+Y(i,j)^2 <= (D/2)^2 rho = sqrt(X(i,j)^2 + Y(i,j)^2); if rho == 0 H(i,j) = 1; else H(i,j) = 2*besselj(1,k*rho*NA*focal_length/(D*sqrt(focal_length^2+X(i,j)^2+Y(i,j)^2)))/(k*rho*NA*focal_length/(D*sqrt(focal_length^2+X(i,j)^2+Y(i,j)^2))); end end end end % 计算扩散函数 PSF = (2/k^2)*((abs(fftshift(fft2(sqrt(H))))).^2); % 归一化扩散函数 PSF = PSF/sum(PSF(:)); % 显示扩散函数 figure, imshow(PSF,[]), title('Point Spread Function'); % 计算衍射-limited图像 object = imread('object.png'); % 加载物体图像 object = imresize(object,[M,M]); % 调整物体图像大小 object = im2double(object); % 转换为double类型 image = conv2(object,PSF,'same'); % 计算卷积图像 % 显示衍射-limited图像 figure, imshow(image,[]), title('Diffraction-limited Image'); ``` 在这个程序中,我使用了Bessel函数来计算传递函数,从而生成了正确的airy psf扩散函数
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