随着糖化学和糖生物学的不断发展,植物、海洋生物及菌类等各类中药来源的多糖已作为有生物活性的天然产物的一个重要类型出现。中药多糖参与及介导细胞内各种生命活动的调节,具有抗肿瘤、抗菌、免疫调节,降血糖、抗病毒、抗氧化、降血脂、抗凝血、抗缺氧、抗衰老等生物活性,且对机体的毒副作用小。
荧光标记技术分析多糖能够具有较高的灵敏度和选择性,其中异硫氰酸荧光素(FITC)在生化研究中应用较为广泛。瑞禧多种菁染料CY3、CY5、CY5.5、CY7、CY7.5,ICG,荧光素FITC,Bodipy系列染料,香豆素及双光子香豆素系列染料,TRITC/Comarin/Bodipy,近红外区域IR系列,ICG系列染料标记。
荧光标记多糖的方法步骤:
(1)将多糖溶解于水中后,加入饱和溴化氰溶液反应,反应3-20分钟,对反应终止后得到的溶液进行纯化;
(2)将步骤(1)中得到的纯化的溶液浓缩至干,用0.1-0.3M的硼砂溶液溶解,加入荧光素,避光反应后得到荧光标记的多糖。
步骤条件:
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步骤(1)中,反应在pH>10,优选pH为10-12的条件下进行。
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步骤(1)中,时间控制在5-10分钟,最好7-10分钟。
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步骤(1)中,对反应终止后得到的溶液进行纯化的方法包括将反应终止后得到的溶液对水透析。
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步骤(2)中,硼砂溶液的浓度为约0.2M,且硼砂溶液用量与多糖用量的比例为0.1-1:1(V(ml)/W(mg))
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避光反应在溶液的pH为7-9条件下进行。
荧光标记多糖的选择:
多糖可以是葡聚糖或者果胶多糖,如,葡聚糖和果胶多糖的一种或多种;
多糖可以是植物、海洋生物及菌类等各类中药来源的多糖。
多糖可以是灰树花多糖、灵芝多糖、香菇多糖、天麻多糖或柑橘果胶多糖。
果糖山梨糖、塔格酮糖、肌醇、阿洛糖、松醇、木聚糖、纤维寡糖、苦杏仁苷、异乳糖、唾液酸寡糖、来苏糖、五羟基戊烷/木糖醇、芦丁糖/芸香糖、修饰甜菊糖、帕拉金糖、棉子糖、五碳醛糖、三糖、车前三糖、异麦芽三糖、1-蔗果三糖、D-(+)-松三糖、D-(+)-麦芽三糖、肌糖、虫草多糖、松花粉多糖、半乳糖.
ICG-inositol 吲哚菁绿标记肌醇
ICG-allose 吲哚菁绿标记阿洛糖
ICG-松醇
ICG-Xylan 吲哚菁绿标记木聚糖
ICG-纤维寡糖
ICG-LPS 吲哚菁绿标记脂多糖
ICG-CM-dextran
ICG-CM-polysucrose
ICG-DEAE-dextran
以上资料来自小编西安瑞禧生物YQ2021.4