COOH-PEG4-SiR,SiR COOH聚乙二醇修饰羧基化硅基罗丹明染料

最新推荐文章于 2024-09-22 21:26:37 发布

Qiyue齐岳生物

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2位羧基取代硅基罗丹明在生物成像中的应用由于硅基罗丹明类荧光探针的优秀的光谱学性质及良好的跨膜性，非常适合用于活细胞荧光成像实验中，可以作为一种有效的工具来研究细胞内许多生理学和化学生物学问题，受到了研究人员的极大关注。 J ohnsson课题组试图用自标记蛋白标签技术( Sel f- l abel l i ng protei n tags) ，如SNAP． tag，将硅基罗丹明染料选择性地对兴趣蛋白( Protei ns of i nterest， POI ) 进行标记。但实验结果表明， 2位甲基取代的硅基罗丹明Si R- methyl 由于在细胞内存在非特异性结合，使荧光背景升高。而2’ ．位羧基取代的硅基罗丹明Si R- earboxyl 则很好地解决了这一问题。进一步研究发现，SiR- carboxyl 可以以有荧光的开环态或以无荧光的螺环态两种形式存在，二者之间的平衡关系与探针分子所处溶剂的介电常数密切相关—在介电常数高的溶剂中( 亲水极性环境) ，主要成有荧光的开环态；在介电常数低的溶剂中( 疏水非极性环境) ，主要成无荧光的关环态( 图25， 25． 1) 。由此，他们合成了探针Si R． SNAP、 Si R- CLI 和探针Si R- COOH( 图25 25． 2) 。以Si R- SNAP为例，细胞内未反应的探针Si R． SNAP因为形成聚集体或与疏水性的蛋白表面结合而主要以无荧光的螺环态存在，从而降低了背景荧光；同时，与SNAP． tag结合的探针分子则主要以强荧光的开环态存在。他们用受激发射损耗( Sti mul ated emi ssi on depl eti on， STED) 技术将探针Si R- SNAP用于活细胞超高分辨率荧光显微成像实验中，成功地观察到了人工表达SNAP． Cep41的U20S细胞内中心体结构，而这一结构由于结构微小( 200 nm) ，用传统的激光共聚焦显微镜无法清晰观测。