《生物化学与分子生物学》----蛋白质----听课笔记（五）

第四章  蛋白质

4.2.1 蛋白质的共价结构（1）

• 蛋白质是生活细胞内含量含量最丰富的、功能最复杂的生物大分子，并参与了几乎所有的生命活动和生命过程。因此，研究蛋白质的结构与功能始终是生命科学最基本的命题。

蛋白质的元素组成与分类

• 蛋白质的主要元素组成：C、H、O、N、S及P、Fe、Cu、Zn、Mo、I、Se等元素。
• 蛋白质评价含N量为16%，这是凯氏（Kajedahl）定氮测蛋白质含量的理论依据。
• 蛋白质含量=蛋白质含N量×6.25
• 蛋白质根据分子形状分类：球状蛋白质和纤维状蛋白质
• 蛋白质根据组成分类：简单蛋白质和结合蛋白质
• 简单蛋白质分类：清蛋白，球蛋白，谷蛋白，醇溶蛋白，组蛋白，精蛋白，硬蛋白
• 结合蛋白质分类：和蛋白类，糖蛋白类，脂蛋白类，磷蛋白类，黄素蛋白类，色蛋白类，金属蛋白类
• 蛋白质根据功能分类：活性蛋白质（如酶蛋白、转运蛋白、运动蛋白、饱和和防御蛋白、受体蛋白……）；非活性蛋白质（如硬蛋白、角蛋白）

蛋白质分子的形状和大小

• 根据蛋白质的形状和溶解度分类：

1. 纤维状蛋白：多数不溶于水和稀盐酸，少数如肌球蛋白可溶
2. 球状蛋白：可溶
3. 膜蛋白：不溶于水，可溶于去污剂

• 蛋白质相对分子量变化很大，一般在6000~1×，胰岛素认为是最小的蛋白质，作为单位。比胰岛素更小的称为肽。

蛋白质结构和功能的多样性

• 蛋白质序列的多样性决定了其功能的多样性。
• 蛋白质的主要功能：

1. 催化：大多数酶是蛋白质。
2. 调节：如激素和反式作用因子。
3. 转运：如血红蛋白、载脂蛋白、膜转运蛋白。
4. 贮存：如种子蛋白和卵清蛋白。
5. 运动：如肌肉、微管蛋白等。
6. 结构成分：如角蛋白、胶原蛋白等。
7. 支架作用：如锚定蛋白、连接蛋白等。
8. 防御和进攻：如抗体、毒蛋白等。
9. 特殊功能：如甜蛋白、胶质蛋白等。

4.2.2 蛋白质的共价结构（2）

肽和肽键的结构

• 肽(peptide)是氨基酸的线性聚合物，因此也称肽链（peptide chain）。
• 蛋白质中氨基酸的基本连接方式是肽键（petide bond）。
• 最简单的肽为二肽（dipeptide），含一个肽键。
• 一般把不多于12个残基的肽叫二肽、三肽……十二肽。
• 不多于20个残基的肽叫寡肽（oligoteptide）。
• 多于20个残基的肽叫多肽。
• 氨基酸残基（amino acid residue）。
• 肽基的C、O和N原子间的共振相互作用。
• 共振产生的重要结果：

1. 产生键的平均化（键长：1.33nm，介于1.25~1.45nm之间）
2. 形成酰胺平面或肽（基）平面（amide/peptide plane）
3. 限制绕肽键的自由旋转
4. 肽键呈反式结构

• 肽的晶体熔点高，说明是离子晶格。
• 肽至少有一个游离的氨基和游离的羧基，也是两性化合物，至少有2级解离，通常都有多级解离。因此，肽在水溶液中也能够带电，也有自己的等电点pl，其计算与测定同于氨基酸。

4.2.3 蛋白质的共价结构（3）

• 肽游离的α-氨基、α-羧基、R基团的化学反应与氨基酸类似。
• 双缩脲反应：（双缩脲相似于三肽，即2个肽键），与碱性硫酸铜溶液反应，生成紫红色化合物。凡大于三肽的肽都能发生此反应，2肽不行。
• 谷胱甘肽在体内参与氧化还原过程，作为某些氧化还原酶的辅因子，或保护巯基酶，或防止过氧化物积累。

蛋白质（多肽）一级结构的测定

• 基本策略：片段重叠法+氨基酸顺序直测法。
• 基本步骤：

1. 测定蛋白质分子中多肽链数目。
2. 拆分蛋白质的多肽链，断开多肽链内二硫键。
3. 分析每一条多肽链的氨基酸组成。
4. 鉴定多肽链N-末端、C-末端氨基酸残基。

• 

多肽N-、C-末端氨基酸的测定

• N-端常用方法（前三种跟氨基酸测序方法一致）：

1. Sanger法（二硝基氟苯反应）
2. DNS法（丹磺酰氯反应）
3. Edman法（苯异硫氰酸酯反应）
4. 氨肽酶法

• 氨肽酶（amino peptidase）:从N端开始一个个水解肽键。常用的亮氨酸氨肽酶（Leu amino peptidase）。
• N-末端氨基酸被封闭。
• 如焦谷氨酰环化、乙酰化等。焦谷氨酸氨肽酶处理。
• C-端常用方法

1. 肼解法
2. 还原法
3. 羧肽酶法

4.2.4 蛋白质的共价结构（4）

• 羧肽酶A：Arg、Lys、Pro除外的氨基酸残基。
• 羧肽酶B：仅Arg、Lys。
• 羧肽酶C：除羟脯氨酸外的所有的氨基酸残基。
• 羧肽酶Y：所有的氨基酸残基。
• 片段重叠法确定肽段在多肽链中顺序。