名称:Mag-Fura-2 AM, Cell Permeant 镁离子荧光探针
CAS:130100-20-8
化学名:5-Oxazolecarboxylic acid, 2-[5-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethoxy]-6-[bis[2-[(acetyloxy)methoxy] -2-oxoethyl]amino]-2-benzofuranyl]-(acetyloxy)methyl ester
同义名:Furaptra, AM ester
分子式:C30H30N2O19
分子量:722.56 g/mol
结构式:
外观:黄色固体
纯度:≥90%
Ex/Em:336/503 nm
溶解性:溶于DMSO
保存:-20ºC干燥避光保存,至少一年有效。
运输:冰袋运输
Mag-Fura-2 AM是一种胞内镁离子指示剂,属于紫外激发的比率型探针,与镁离子结合的Kd值为1.9mM。与Fura-2类似,Mag-Fura-2的激发波长历经蓝色迁移从369nm到330nm。Mag-Fura-2 AM具细胞膜渗透性,只需简单孵育,即可加载进入细胞。
使用方法:
1.储存液制备
取一管低温保存的Mag-Fluo-4 AM,置于室温回温至少20min。之后加入高质量无水DMSO配制成1~5mM储存液,比如50μgMag-Fluo-4 AM(Mw:817.65 g/mol)溶于12μl DMSO,充分溶解后,即得到5mM储存液。
【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃,避免反复冻融,且要避光保存。尽快使用完。
2.操作步骤
【注意】以下使用方法仅作参考,需根据具体的细胞类型和实验要求做出调整。加载温度范围是RT~37℃,更高温度会提高加载速度,但更低温度能最小化染料的内在化现象。表面活性剂Pluronic®F-127有时加入能促进AM探针在水溶性缓冲液内的均匀分散。
2.1 在所需温度(25℃~37℃)预孵育细胞10min,使其离子梯度达到稳定和平衡。
2.2 取4μl Mag-Fluo-4 AM储存液和5μl 20% Pluronic®F-127,加入1ml细胞培养液,剧烈漩涡混匀得到均匀的探针分散液。
2.3 取250μl上述制备的探针分散液加入750μl含细胞的培养基内,混匀,此时得到终浓度为1~5μM的工作液,根据起始母液浓度来确定。
2.4 根据需求探针孵育15~60min。
2.5 细胞清洗3次,之后继续孵育30min以保证细胞内的探针完全去酯化。之后选择合适的仪器,进行荧光测定。
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