【His tag 简介】
His-tag是蛋白质重组技术中经常用到的一种标签,其序列为6个组氨酸HHHHHH,其特点是分子量小,只有不到0.84 KD,基本不改变蛋白质的生物结构,不改变蛋白质的溶解性,更重要的是它使蛋白质的纯化变得极为方便。
【中文名称】六聚组氨酸
【英文名称】 6His Tag
【分子式】C36H44N18O7
【CAS号】CAS:64134-30-1
【单字母】NH2- HHHHHH -COOH
【三字母】 NH2- His - His - His - His - His - His -COOH
【结构式】
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【理化性质】
Number of residues: | 6 | ||
Molecular weight: | 840.85 g/mol | ||
Extinction coefficient: | 0 M-1cm-1 | ||
Iso-electric point: | pH 7.97 | ||
Net charge at pH 7: | 0.6 | ||
Estimated solubility: | Poor water solubility. |
【六聚组氨酸标签在蛋白质相互作用研究中的具体应用】
1、蛋白质纯化:6xHis标签可以与金属离子结合,尤其是镍离子,这使得带有该标签的蛋白质可以通过金属螯合亲和层析(IMAC)进行高效纯化。这种纯化方法可以在温和的条件下进行,有助于保持蛋白质的活性和结构。
2、蛋白质相互作用研究:在研究蛋白质与其他分子(如蛋白质、DNA)的相互作用时,6xHis标签可以作为一个亲和标签,帮助研究者通过亲和层析等方法富集目标蛋白质复合物,从而分析其相互作用。
3、检测和定量:由于6xHis标签具有较高的亲和力和特异性,它可以用于检测和定量目标蛋白质的表达水平。结合使用特定的抗His标签抗体,可以通过Western Blot等技术对蛋白质进行检测和定量分析。
4、蛋白质定位和亚细胞结构研究:6xHis标签可以与荧光蛋白或其他报告基因融合,用于在细胞内追踪和定位目标蛋白质,这有助于研究蛋白质的功能和亚细胞分布。
5、蛋白质药物开发:在蛋白质药物的研发中,6xHis标签有助于纯化药物蛋白,提高药物的产量和质量,并可能用于药物的靶向输送和定位。
【六聚组氨酸标签相比其他常见的蛋白质标签的七大优势】
1、分子量小:His-tag的分子量只有约0.84 kDa,远小于其他标签如GST(约26 kDa)和蛋白A(约30 kDa),因此对目标蛋白的功能影响较小。
2、纯化条件温和:His-tag融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化,适用于纯化疏水性强的蛋白或包涵体蛋白。
3、高亲和力和特异性:组氨酸残基侧链与镍离子有强烈的吸引力,可以通过固定化金属螯合层析(IMAC)高效纯化His-tag融合蛋白。
4、适用性广泛:His-tag可以应用于多种表达系统,并且可以与其他亲和标签一起构建双亲和标签,提供灵活性。
5、免疫原性低:His-tag的免疫原性相对较低,纯化后的蛋白可以直接用于动物免疫制备抗体。
6、可在变性和非变性条件下纯化:His-tag标签提供了在不同条件下纯化蛋白质的灵活性,这对于保持蛋白质的活性和结构非常重要。
7、易于检测:His-tag可以通过特定的抗体进行检测,便于研究蛋白质的表达和定位。