牛眼晶体上皮细胞培养方法

培养方法：
1.市场取牛眼，剪去周围的结缔组织，然后放于1/2000 U庆大液中，30分钟消毒。
2.超镜台中，将牛眼取出,D-Hanks液清洗3次,剪刀从角巩膜缘后5mm左右处剪开巩膜，环形剪开眼球，将角膜、虹膜等眼前节组织去除，暴露晶体。
3.将悬韧带剪断，取出晶体，从赤道部靠下一点环形剪开晶体，镊子取下前囊膜，将囊膜面朝上，放于培养皿中。
4.加入0.25%的胰酶消化，消化过程中可以用吸管轻微吹打，消化时间8－15分钟左右。然后加入血清培养基中止。
5.直接将消化后的液体加入培养瓶中培养，细胞贴壁，3天后换液，6－7天传代，然后细胞就可以用于实验使用。

心得：
1.我觉得培养用的牛眼不一定需要胎牛或小牛眼，成年牛眼一样是可以做出来的，而且细胞的形态和状态都还不错，成年牛眼我已经养出好几次了
2.培养方法问题，以前都是用组织块培养法，但是我觉得效果并不是很好，而且周期比较长，消化法更容易培养出细胞。
3.有人推荐用胰酶＋EDTA消化，然后离心。个人感觉就用胰酶消化即可，就可以省去离心这一步，减少细胞丢失，可以直接将消化后液体加入培养瓶培养。
4.消化时间非常关键，时间长短如果控制不好，将会导致整个实验的失败。个人认为时间要自己摸索，和实验室条件，胰酶的情况有关，个人感觉最好不要超过15分钟，那样将会导致细胞漂浮，死亡，不容易贴壁。消化温度，如果天气较热，就在室温下即可。较冷，可以放在培养箱中孵育。

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