【评测】高保真cas9、cas12核酸酶

高度特异性基因组编辑，即使在棘手条件下亦不受影响；

Alt-R S.p. HiFi Cas9 核酸酶 V3 是一种高保真化脓性链球菌 Cas9 蛋白，可在不影响性能的情况下，显著降低脱靶效应，是常规

实验的最佳选择，且非常适合棘手的基因组编辑应用情况。

Alt-R S.p. HiFi Cas9 酶可方便地取代野生型 Cas9 在当前领域的应用，无需改变实验方案。该酶与 Alt-R CRISPR-Cas9 系统的

其他组分相容，可通过原有的优势核糖核蛋白 (RNP) 流程进行精准的基因组编辑。

 

图 1. Alt-R S.p. HiFi Cas9 核酸酶 V3 可达到接近野生型的中靶编辑效率，显著减少了脱靶位点编辑。

Alt-R S.p. Cas9核酸酶 V3 或 Alt-R S.p. HiFi Cas9 核酸酶 V3 与靶向 EMX1基因的 Alt-R crRNA:tracrRNA 复合物结合，从而形成了 RNP复合物。通过 Nucleofection™ 法 (Lonza) 将 RNP 复合物 (4 µM)转染导入 HEK-293 细胞中。通过二代测序（rhAmpSeq™ 扩增子测序，IDT）测定了中靶基因座和 9 个已知脱靶位点的插入缺失形成（以 y 轴上的对数标度表示）。

 

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对照试剂盒组成试剂

• Alt-R CRISPR HPRT 阳性对照 crRNA

• Alt-R CRISPR 阴性对照 crRNA #1

• Alt-R CRISPR-Cas9 tracrRNA

• Alt-R HPRT PCR 混合引物

• 无核酸酶二聚体缓冲液

精选引文：

1. Vakulskas CA, Dever DP, et al. (2018) A high-fidelity Cas9 mutant delivered as a ribonucleoprotein complex enables efficient gene editing in human hematopoietic stem and progenitor cells.Nat Med. 24:1216–1224. doi: 10.1038/s41591-018-0137-0.

2. Park SH, Lee CM, et al. (2018) Highly efficient editing of the beta-globin gene in patient derived

hematopoietic stem and progenitor cells to treat sickle cell disease. Blood, 132(Suppl 1), 2192. doi: 10.1182/blood-2018-99-117371