如上图所示,CRISPR-Cas9和CRISPR-Cas12是两种常用的基因编辑技术,它们在作用机制、DNA切割特异性、应用范围等方面存在一些区别和联系。
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作用机制:
- Cas9:通过引导RNA(gRNA)与目标DNA序列特异性结合,形成DNA双链断裂(DSB)。Cas9在DSB位点引发DNA修复过程,进而实现基因敲除或敲入。
- Cas12:与Cas9相比,Cas12具有更宽泛的DNA切割特异性,不需要额外的tracrRNA,而只需要一个单一的引导RNA(sgRNA)。Cas12同样在目标DNA位点引发DSB。
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DNA切割特异性:
- Cas9:具有较高的特异性,需要PAM序列(Protospacer Adjacent Motif)作为识别信号,通常为NGG或NAG。
- Cas12:对PAM序列的要求更为宽松,如FnCpf1对PAM序列没有严格要求,而LbCpf1对PAM序列的要求与Cas9相似。
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应用范围:
- Cas9:广泛应用于各种生物体的基因编辑,包括植物、动物、微生物等。
- Cas12:由于其更宽泛的DNA切割特异性,在某些情况下可能更适合特定应用,如植物基因编辑中的非特异性切割,或是在某些难以使用Cas9进行编辑的生物体中。
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脱靶效应:
- Cas9:存在一定的脱靶效应,这是基因编辑技术中需要关注的问题。
- Cas12:脱靶效应可能比Cas9更为显著,因此在设计和应用时需要特别注意。
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引导RNA的设计:
- Cas9:需要设计tracrRNA和gRNA的嵌合体。
- Cas12:只需要设计一个sgRNA,简化了引导RNA的设计过程。
总体来说,Cas9和Cas12都是强大的基因编辑工具,各有优势和适用范围。选择使用哪种系统通常取决于具体的研究目的、实验条件和目标生物体的特性。随着基因编辑技术的不断进步,未来可能会有更多基于CRISPR的核酸酶系统被开发出来,提供更多样化的编辑选择。