PEI转染试剂使用注意事项

细胞转染的方法有很多种，包括物理法（如电穿孔法等）、化学法（如脂质体转染试剂等）和生物法（如慢病毒、腺病毒等），实验室中常见的主要是使用化学法的转染试剂进行细胞转染，在实际操作过程中，可能会遇到细胞死亡或者转染效率低等情况，今天小编就为大家带来转染试剂使用时的注意事项。

首先还是给大家讲一下什么是PEI转染试剂，它是人工合成的含有极高密度正电荷的有机大分子阳离子聚合物。PEI与DNA通过正负电荷的相互吸引形成复合物，当复合物接近细胞膜时被内吞成为内体进入细胞质，随后DNA复合物被释放进入细胞核内是较为有效的聚阳离子型基因载体。

下面是几方面需要注意的地方：

1、培养基

在开始准备DNA和阳离子脂质体试剂稀释液时一般要使用无血清的培养基，因为血清会影响复合物的形成。此外，抗生素是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率降低。

2、细胞状态

为了高效率的转染，在细胞转染前，需确保细胞具有良好的生长状态和较高的细胞密度。以PEI 40000转染试剂为例，为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，以转染时细胞密度在70%~80%为宜。在制备复合物之前，需将4-8×105细胞置于500μL不含抗生素的生长培养基中。

3、核酸质量：

（1）质粒DNA：纯化质粒的质量会影响转染效率，要选择高质量的质粒。用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其他化学物质的污染。

（2）RNA/siRNA：高纯度的RNA需要通过纯化的方式除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。

4、转染优化：

转染DNA时，为了获得最高的转染效率和低细胞毒性，可通过改变细胞密度以及DNA和PEI转染试剂浓度来优化转染条件

5、避免污染

如菌类污染，支原体污染等。在进行RNA或者siRNA转染，还需要避免RNA酶污染，由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过的物品或暴露在空气中的物品等，因此保证实验中的每个环节不受RNA酶污染非常重要。

6加液：

滴加液体时一定要用移液器一滴一滴加。

以上就是PEI转染试剂使用时的注意事项，希望对大家有帮助，有任何问题欢迎大家在评论区留言。