PEI转染试剂操作步骤

细胞治疗是指采用生物工程的方法获取具有特定功能的细胞，并通过体外扩增、特殊培养等处理后，使这些细胞具有增强免疫、杀死病原体和肿瘤细胞等功能，从而达到治疗某种疾病的目的。聚乙烯亚胺（PEI）转染是目前应用最广泛的rAAV质粒共转染HEK293细胞的方法之一。与钙介导的转染相比，PEI更可靠；与脂质体介导的转染相比，PEI具有更好的可扩展性和成本效益。已在众多研究文献中被证明是创建高传染性rAAV/LV的有效选择。

中科百抗Bestop™ PEI线性转染试剂(BM350101)是一种高性能转染试剂，专为稳健、低成本和可扩展的瞬时基因表达而设计，是用于瞬时转染 HEK293 和 CHO 悬浮培养物的最常用试剂，也是在哺乳动物表达系统中生产重组蛋白、抗体和病毒（AAV、BV 等）的首选试剂。Bestop™ PEI线性转染试剂具备高效的转染能力，同时兼顾低毒性，能够有效避免对细胞的损伤，利于转染后细胞存活。下面小编将以Bestop™ PEI线性转染试剂为例，向大家介绍一下PEI转染试剂操作步骤。

PEI转染试剂使用比较方便，对血清与抗生素兼容性强。具体操作步骤范例如下（以HEK293细胞为例）：

1.转染前，确保细胞存活率大于95%，活细胞密度在(1.5~2.0)×106cells/mL之间；

2.将活细胞密度稀释至1.05×106cells/mL；

3.将pDNA和1mg/mL Bestop™PEI线性转染试剂颠倒数次，混匀；

4.每毫升待转染培养物转1μg pDNA到一个干净的小瓶中。用新鲜培养基稀释至20μg/mL（5%最终培养体积）。

5.每毫升待转染培养物转3μL 1 mg/mL中科百抗Bestop™ PEI线性转染试剂(BM350101)至干净的小瓶中。用培养基稀释至60μg/mL(5%最终培养体积)。

6.将稀释的pDNA和中科百抗Bestop™ PEI线性转染试剂(BM350101)混合。颠倒几次，在室温下静置10分钟。使用前将密封的容器轻轻颠倒一次。

7.每90 mL培养基转染10 mL pDNA/PEI混合物。在混合的同时逐渐将混合物加入到培养基中，孵育细胞。

8.转染后：如果使用增强剂或补充剂，可以在转染后6小时的任何时间添加。传代培养也可以在6小时后进行。如果使用GFP对照，48小时后应观察到转染率超过70%。对于优化过的方法，80%以上的转染率是合理的。

以上就是PEI转染试剂的操作步骤啦，小编在这里还要提醒大家，初次使用PEI进行转染时，请先优化出适合自己实验的最佳DNA和PEI比例，以便转染实验可以顺利、准确地完成。