PCR实验室建设,污染源来源哪里?(cr:SICOLAB)
(1)样本交叉感染:
- 收集样本容器密封不严外溢
- 不同样本移液忘记更换枪尖或没使用滤芯枪尖
- 实验室器具未及时消毒
- 不同样本开盖或激烈震荡、反复吸气导致气溶胶扩散
(2)试剂污染:
1.试剂加样过程中,移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染
2.PCR试剂对温度有要求,需要通过冰浴使PCR试剂处于0摄氏度,过程存在污染风险
(3)扩增产物污染
1.大量拷贝产物泄露导致试剂意外开瓶,这是常见主要污染源问题
影响:大量拷贝产物量大,高于PCR检测拷贝极限,导致极微量的PCR产物污染,就可形成假阳性。
(4)克隆质粒污染
作为阳性质控品的克隆质粒外溢。
PCR实验室建设,怎么做好防止污染措施?
1.手套正确佩戴:手套紧贴拇指、食指和中指
2.正确使用生物安全柜:平时保持整洁,避免操作时堵住风口,操作前后,紫外线照射,消毒随手可及,及时清理废液缸,确保废物不超过废液缸体积的2/3。
3.设备消毒:多批次检测,检测完后75%乙醇和核酸去除剂对仪器进行去污染
4.保持通风:不定期每次至少持续30min通风
5.PCR扩增区去污染:试管盖紧,避免污染
PCR实验室建设,避免事项
1.避免紫外线消毒器及化学消毒进有人状态下消毒。
2.减少人员走动,悬挂紫外线灯管消毒,操作前照射30-60分钟,实验结束照射30-60分钟,必要时延长照射时间(可照射一夜)。
PCR实验室建设,最终消毒
撤离人人员,无人状态下消毒:熏蒸法:过氧乙酸1g/ m³加热熏蒸(湿度70-90%),密闭24小时;气溶胶喷雾:3%过氧化氢:20mL/m³气溶胶喷雾;5%过氧乙酸2.5mL/m³气溶胶喷雾(湿度20-40%)。