博奥龙/biodragon答疑时刻 | 如何检测小鼠血清效价？

在动物免疫过程中，以及免疫流程完成后，均可以通过眼球采血等方式获得少量的血清进行效价检测，来不断检测动物免疫效果，最常见的是使用间接ELISA（酶联免疫吸附测定）法进行检测，其流程可参考如下步骤：

（1） 最后一次免疫小鼠 间隔2周后，取各免疫鼠尾尖血或眼静脉丛采血100～200μL，12000rpm，15min离心，取上层血清，梯度稀释后用间接ELISA法检测血清内的抗体效价；

（2） 间接ELISA检测参考方案：

a) 包被：将抗原以pH 9.6 的NaCO3-NaHCO3 包被到酶标板中，浓度可参考2ug/ml，50-100ul/孔，4°C孵育过夜或37℃包被2h。

b) 洗板：用PBST洗涤三次。

c) 封闭：封闭液（如，1% BSA，0.1% Tween-20, pH 7）100ul/孔。如果载体蛋白是BSA，则用1%的脱脂奶粉代替BSA。4 ℃过夜或者37 ℃孵育2小时。

d) 洗板：用PBST洗涤三次。

e) 加一抗：小鼠抗血清可以从1:500稀释比开始倍比稀释，至少稀释8个浓度梯度（或可参考以下稀释比：1:625, 1:1250, 1:2500, 1:5k, 1:10k, 1:20k,1:40k, 1:80k, 1:160k, 1:320k,1:640k, 1: 1280k）, 阴性血清和抗血清同比稀释，作为对照孔。每个浓度梯度建议设置2-3复孔，100ul/孔，做好对应标记，37°C 孵育1h。

f) 洗板：用PBST洗涤三次。

g) 加二抗：HRP山羊抗鼠IgG（H+L）#BF03001，1:5000稀释，100ul/孔，37°C孵育45min。

h) 洗板: 用PBST洗涤三次。

i) 显色: 加入底物溶液（TMB）#BF06007，100 μl/孔，反应5-10min，根据显示效果调整时间。

附：小鼠血清免疫滴度结果示例