考马斯亮蓝法(coomassie blue staining,又被称为Bradford法)是1976年由Bradford等人建立的一种测定微量蛋白质的方法,由于灵敏度高,是目前最为常用的蛋白质染色方法。既克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制,又比银染简便易操作。试剂配制简单,操作简便快捷,反应灵敏。
这种方法不仅可以测定蛋白质溶液中蛋白质含量,考马斯亮蓝法还可以用来检测蛋白质电泳后蛋白质的迁移是否均匀,以及转膜后用于检测转移的有效性(PAGE胶上残余蛋白的检测)。除了考马斯亮蓝染色法以外,其他常用的方法包括银染法、同工酶染色、专一蛋白染色、荧光标记等。
注意:凝胶中的蛋白在电源关闭后扩散,为了防止扩散,需要用固定液(40%双蒸水、10%冰醋酸、50%甲醇)处理凝胶(30min或者过夜),可促使几乎所有的蛋白沉淀,方便后续的染色和脱色处理。
考马斯亮蓝法拥有两种染色与脱色方法:
第一种是电泳完毕后,直接染色,但脱色的时间长,一般需要过夜。脱色时先用高浓度脱色液脱色,再用低浓度脱色液脱色;
第二种方法是电泳完毕后,先固定30分钟,随后高温染色30分钟,再高温进行脱色,一般很快就会出现结果,但这种方法的蛋白胶不太容易制成干胶,且高温时脱色液会产生刺激性气体,危害身体健康。
然而传统的考马斯亮蓝染色法染色耗时长,成本高,需要加热换液操作麻烦,重复性差,灵敏度不高,脱色液中的甲醇、乙酸等有毒刺激性液体还会造成实验室及周围环境的污染,危害操作人员的身体健康。
换上博奥龙QuickBlue快速染胶液,染胶快速又安全!QuickBlue快速染胶液是绿色环保型凝胶染液,可对凝胶中的蛋白条带进行染色,可替代常规的考马斯亮蓝染液。
对于灵敏度要求不是极高的普通实验室的染胶实验,一般染色10-20分钟(可以将100ng含量以上的蛋白染出条带),低背景,无需脱色,直接观察或者拍照;
对于灵敏度要求极高的染胶实验,一般可采用染色1-2小时(可以将10ng含量蛋白染出条带),低背景,无需脱色,直接观察或者拍照;