不会吧，蛋白质染色你还在用考马斯亮蓝？

考马斯亮蓝法（coomassie blue staining，又被称为Bradford法）是1976年由Bradford等人建立的一种测定微量蛋白质的方法，由于灵敏度高，是目前最为常用的蛋白质染色方法。既克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制，又比银染简便易操作。试剂配制简单，操作简便快捷，反应灵敏。

这种方法不仅可以测定蛋白质溶液中蛋白质含量，考马斯亮蓝法还可以用来检测蛋白质电泳后蛋白质的迁移是否均匀，以及转膜后用于检测转移的有效性（PAGE胶上残余蛋白的检测）。除了考马斯亮蓝染色法以外，其他常用的方法包括银染法、同工酶染色、专一蛋白染色、荧光标记等。

注意：凝胶中的蛋白在电源关闭后扩散，为了防止扩散，需要用固定液（40%双蒸水、10%冰醋酸、50%甲醇）处理凝胶（30min或者过夜），可促使几乎所有的蛋白沉淀，方便后续的染色和脱色处理。

考马斯亮蓝法拥有两种染色与脱色方法：

第一种是电泳完毕后，直接染色，但脱色的时间长，一般需要过夜。脱色时先用高浓度脱色液脱色，再用低浓度脱色液脱色；

第二种方法是电泳完毕后，先固定30分钟，随后高温染色30分钟，再高温进行脱色，一般很快就会出现结果，但这种方法的蛋白胶不太容易制成干胶，且高温时脱色液会产生刺激性气体，危害身体健康。

然而传统的考马斯亮蓝染色法染色耗时长，成本高，需要加热换液操作麻烦，重复性差，灵敏度不高，脱色液中的甲醇、乙酸等有毒刺激性液体还会造成实验室及周围环境的污染，危害操作人员的身体健康。

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对于灵敏度要求不是极高的普通实验室的染胶实验，一般染色10-20分钟（可以将100ng含量以上的蛋白染出条带），低背景，无需脱色，直接观察或者拍照；

对于灵敏度要求极高的染胶实验，一般可采用染色1-2小时（可以将10ng含量蛋白染出条带），低背景，无需脱色，直接观察或者拍照；