脂质体RNP法基因编辑专用转染试剂

利用RNA引导的Cas9蛋白与靶基因相结合,通过碱基互补配对的方式,使Cas9蛋白精准识别并结合到目标DNA序列上。一旦结合,Cas9蛋白会在目标DNA上形成一个双链切割复合物,并在特定的位点引发DNA双链切割。在细胞内,这种双链切割会触发DNA修复机制,从而实现基因组的编辑和修饰。

质粒法

通过构建含有Cas9和SgRNA的基因序列的质粒,通过电穿孔,脂质体包裹等其他转染方法将其转染到目标细胞中,而后通过转录和翻译等步骤,实现其功能。此方法成本低,实操起来难度较低,但遇到难转细胞时,脱靶率较高,效率就会大大降低。

病毒载体法

尤其是慢病毒载体法,可以将含有Cas9和SgRNA的基因序列有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达目的序列的效果。此方法对于难转细胞是一个不错的选择,但是有些病毒对某些细胞的毒性较大,!需要考虑潜在的免疫反应和细胞毒性问题。

RNP法

是目前较为先进的一种技术,它是直接将Cas9蛋白与SgRNA的复合物转到目标细胞中,快速定位目标DNA,从而发挥其功能。此方法无需DNA的递送,有效地降低了脱靶效应,并且可以快速清除,在完成任务后自动降解,既安全又高效。

目前RNP被认为是最安全,脱靶效应最低的技术,其中将RNP蛋白质复合物转到目标细胞中是最为重要的,那么选择一个好的蛋白转染试剂将事半功倍。

是博奥龙最近上新的一种新型的阳离子脂质体转染试剂,用于将功能性蛋白高效地输送到真核细胞内,可高效转染RNP(SgRNA和Cas9蛋白复合物)。该转染试剂能够与蛋白形成带正电荷的非共价复合物,细胞膜表面带负电荷,能够将该复合体吸附,被吸附后的复合体能够通过膜融合作用或者细胞内吞的方式形成包涵体进入细胞,并释放到细胞质中进行解离。整个输送过程低毒,并可有效地传递功能性蛋白,转染效率可媲美甚至优于进口试剂CRISPRMAXTM的基因编辑效率(图1)!

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