常规实验所用溶液配方大全

常规实验所用溶液配方大全
1.0.5mol/LEDTA 配制
组分浓度： 0.5mol/l EDTA， PH=8
配制量：500ml
配制方法(1)称取93.06克EDTA.Na2.2H2O，置于500 ml烧杯中
(2)加入约400ml dd H2O.用热磁力搅拌器充分搅拌
(3)用NaOH调节PH值到8，约用10克固体NaOH
(4)在溶液冷却后，再用NaOH调节至PH=8
(5)加dd H2O将溶液定容到500 ml
(6)高温高压灭菌后，室温保存
2.NaOH溶液的配制
组分浓度：5 mol/l NaOH
配制量：100 ml
配制方法(1)称取固体NaOH20克于容器中
(2)加入dd H2O定容到100 ml
3.100 mmol/l Tris-HCl的配制
组分浓度： mmol/l Tris-HCl， PH=6.4
配制量：250 ml
配制方法(1)称取3.025克Tris于250 ml烧杯中.
(2)加入约200ml dd H2O充分搅拌溶解.
(3)用浓盐酸调节PH值到6.4.所用浓盐酸约3 ml
(4)将溶液定容至250ml
(5)用棕色瓶分装于4度冰箱中
(6)如使用，用水浴加热溶解.
4.氯仿-异戊醇的配制：
配制方法(1)简单的体积混合，既要求比例为24：1即可
(2)储存于棕色玻璃瓶子中
(3)置于4度冰箱以便日后使用
5.去污剂：
CTAB：可将细胞膜裂解，使DNA释放到提取液中，同时也使组织匀浆中的蛋白质变性.
EDTA：能与DNase的辅助因子Mg2+结合，使DNase失去活性，不能降解从细胞中释放的DNA.
6.还原剂巯基乙醇：它抑制从细胞中释放的多酚氧仿.防止植物组织发黄变褐.
7.氯仿—异戊醇：它可把组织匀浆中变性的蛋白质除去，将DNA与细胞中的蛋白质、碳
水化合物等分开除去.
8.RNase：它可去除核酸中的RNA，只留下DNA.
9.硅珠悬浮液的配制
（1） 称取1.2g硅珠粉，溶解于10ml无菌水中.
（2） 放入4℃冰箱备用.
（3） 使用时先涡旋使其混合均匀
10. 10×TE，500ml配制如下：
将100mM Tris-Hcl（PH=8.0）6.057g与10mM EDTA（PH=8.0）1.8612g溶于400ddH2O中，调PH=8.0，定容到500ml。
11. 1×TE Buffer
组成浓度：10mM Tris-HCl 1mM EDTA PH=8.0
配制量：500ml
配制方法：量取下列溶液于500ml烧杯中
1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml
0.5M EDTA PH=8.0 1ml
向烧杯中加入约400mldd H2O均匀混合；将溶液定容到500ml后，高温高压灭菌；室温保存.
12. 聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE
PAGE操作流程及注意事项：
1、涂胶
1）将有耳玻片（耳朝下）泡于反硅化剂中，新液25分钟，旧液30分钟.
2）涂无耳正面玻片硅化剂.均匀点四滴，轻而匀的沿一个方向涂三次，静10分钟.
3）到时间取出.打开通风橱风干30分钟.
2、封胶
1）将两玻片对贴于橡胶框中，放平，用力拧死，夹住橡胶管.
2） 溶废琼脂胶，分两次：第一次50秒，第二次10-20秒，防止沸出.
3） 用小细长枪头通透加胶枪头，便于加样通畅，少起气泡.
4） 吸2500-3000ul液胶加速沿玻片边缘快速顺下滴，将两面玻片充分封死，防止漏胶.以水平底线面水平高于底为佳，静止凝胶15分钟.（有时可先在封口加一点TBE以润滑玻片，利于胶流下）
3、灌胶
1) 用长细枪头透开加胶枪头
2) 从中间加入，每次不要全部打完，留一点在枪头内.防止断流而导致胶中含有气泡.
3) 插梳子时两端平整，梳子紧贴玻板，梳齿头部不可有气泡.
4) 拔梳子时先加一倍TBE液将梳子泡透，然后平行用力拔出.
5) 在插梳子15分钟内跟踪观察，适当下按，保证孔的深度.
6) 等待2小时，以便胶充分凝固.
4、吹孔
1） 向中间槽加入1倍粗制TBE，要淹没过内玻片约1厘米.
2） 拔梳子，小心平稳，均匀平衡.
3）调1000p枪到300-600ul，进行吹孔，将小孔内沉淀物吹打干净，加样中再视时吹5、加样
1） 用细长专用枪加入DNA 0.5ul.
2） 一手托另一臂的肘，以保证加样手不抖.
3） 一定垂直加到孔中去，不脱尾，不吸水，不靠壁，干净利落.
4） 加完一次.在放于桌旁的吸纸上，将细枪头上余液吸干.
5） 首、中、尾各留1到2个孔，两面胶孔的Marker不完全一样，以便区分.
6） 加Marker 0.15ul 一般取0.3ul每孔注如一半，可用两个孔.
6、跑胶
1) 向两侧槽中加入粗制TBE，至U管线处.
2) 打开电源，稳压到120V
3) 电泳2h左右
4) 当样品跑到底部2cm处，关闭电源.
7、撬玻片
1）刀片不伸入过深.刀片平行于玻片，稍用力.
2）将没有硅化剂的无耳玻片放于水盘中，还有梳子.
3）清理琼脂胶，放于烧杯中.
4）胶玻片放于盘中，银染.
13. 2、TBE电泳母液（10×）的配制
1） 分别称取54克Tris碱，27.5克硼酸，20ml 0.5mol/EDTA（PH=8.0）
2） 将各组分别加入1升烧杯中，用ddH2O定容到1升.
3） 在电泳时使用1倍工作液，按1：4与水混合.
4） 1倍液是为了增加电泳工作液的电流的电流量.
5） 盛于玻璃瓶，在室温保存.
14. AgNO3的配制
量取AgNO3原液2500ul；将250ml dd H2O和2500ul AgNO3加入胶玻片上.
（AgNO3原液的配制：50ml 中含AgNO3 7.5g 浓度为0.15g/ml）
15溴化乙锭（10mg/ml）
﹡组分浓度 10mg/ml 溴化乙锭
﹡配制量 100ml
1．称取1.0g溴化乙锭，加入到200ml容器中。
2．加入去离子水100ml，充分搅拌数小时完全溶解溴化乙锭。
3．将溶液转入棕色瓶，室温避光保存。
4．溴化乙锭最终工作浓度为0.5μg/ml。
15. 20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
17.10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）
16. 5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。
10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。
100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）
2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃
17. DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水
加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。
18. TE（用于悬浮和贮存DNA）
成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/L Tris－HCl
1mmol/L EDTA
水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）
200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
98.8ml
19. 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液
成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱
445 mmol/L 硼酸盐
10 mmol/L EDTA
水 54g
27.5g 硼酸
20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
补足1L