经验证的稳定RSV-pre-F三聚体蛋白--助力疫苗领域百亿蓝海市场角逐战

前  言

历经六十年，RSV疫苗终于上市。今年上半年，美国FDA先后批准GSK和辉瑞的RSV疫苗上市，主要用于60岁以上老年人，且辉瑞的疫苗扩展到妊娠32-36周的孕妇。至此RSV疫苗的百亿蓝海市场角逐战正式打响。

RSV概述

RSV（呼吸道合胞病毒）是一种常见的呼吸道RNA病毒，针对年幼的儿童及60岁以上的老人会导致严重的下呼吸道感染。它包含10个基因，编码11种蛋白质，其中G蛋白和F蛋白是病毒的两个主要保护性抗原。G蛋白具有较高的遗传多样性，用以区分RSV的亚型。F蛋白是一种I型病毒融合蛋白，具有高度保守性，更适合作为疫苗的靶蛋白。

RSV疫苗研究

RSV疫苗的开发真可谓是一路“披荆斩棘”，类型包括减毒疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗等，除了已上市的几款疫苗，大多处于临床或临床前阶段。且上市的疫苗主要用于60岁以上的老人，适用于婴儿和儿童的疫苗还在研发中。

早期的灭活RSV疫苗在临床中出现过接种后呼吸道症状（ERD）增强，这可能与疫苗诱导产生的弱中和活性的抗体有关。随着科学家的不断探索，结果发现适合疫苗开发的F蛋白具有两种构象，即融合前F蛋白（pre-F）和融合后F蛋白（post-F），且pre-F构象可诱导更有效的中和抗体，这可能是解决灭活疫苗产生ERD反应的关键。因此基于pre-F蛋白构象的研究成为RSV疫苗开发的重要方向，获得上市批准的RSV疫苗均为基于pre-F的重组蛋白亚单位疫苗。

RSV pre-F蛋白

RSV病毒表面的F蛋白通常以三聚体形式存在，与硫酸乙酰肝素结合，促进病毒与宿主细胞的融合。F蛋白在不同毒株中相对保守，且在病毒入侵过程中起到关键作用，是RSV疫苗开发的重要靶点。在病毒与宿主细胞膜融合的过程中，F蛋白构象会发生变化，从融合前pre-F构象转化为融合后post-F构象。

研究发现RSV-F存在6种不同的抗原位点，其中4种抗原位点在融合前后均存在。而Φ和Ⅴ位点是仅存在于pre-F构象中的中和抗体敏感位点，因此pre-F蛋白能诱导更高的中和抗体反应，是疫苗设计的关键。因为pre-F蛋白处于亚稳定状态，容易转变为post-F蛋白，所以，如何构建稳定的pre-F蛋白是疫苗开发的关键。

融合前后RSV F蛋白的构象变化（源自参考文献：doi:10.1007/978-3-642-38919-1_4.）

✦义翘神州RSV特色产品

义翘神州已开发具有稳定融合前构象的Pre-F蛋白（货号：11049-VNAS）、RSV Pre-F小鼠血抗体滴度检测试剂盒（货号：KIT053）、RSV-F (A2) 肽库（货号：PP004）等产品以助力RSV疫苗开发。

RSV Pre-F 重组蛋白， Cat: 11049-VNAS

经抗体验证：具有稳定的融合前构象

经SEC-MALS验证：三聚体比例≥ 90%

高批间一致性

CHO稳定株表达，单批次g级供应

高纯度，三聚体比例≥90%

Purity: ≥95% by SDS-PAGE, ≥90% by SEC-MALS (MW ~170 kDa)

高批间一致性

ELISA assay validated: Immobilized RSV Pre-fusion protein can bind to a site Ø specific Pre-F antibody

高稳定性

RSV Pre-F蛋白 (Cat: 11049-VNAS) 经反复冻融5次或置于4℃放置48 h后，理化性质不发生改变，稳定性高。

检测样品	SDS-PAGE浓度	HPLC纯度	分子量（MALS）
原液	99%	98%	170kDa
冻融5次	99%	98%	170kDa
4℃放置48h	98%	98%	170kDa

ELISA结合实验验证，经过5次反复冻融后的Pre-F蛋白与抗体的结合活性没有降低。

不同构象蛋白识别特异性抗体验证

不同构象蛋白	特异识别融合前构象Φ位点抗体	特异识别融合前构象Ⅴ位点抗体	特异识别融合前构象Quaternary-Dependent抗体	特异识别Ⅱ位点抗体
Pre-F蛋白（Cat：11049-VNAS）	√	√	√	√
疫苗开发中的Pre-F蛋白	√	√	√	√
Post-F蛋白	-	-	-	√

· Pre-F特异性抗体（识别位点Ø）验证数据

Immobilized Pre-F protein binds to pre-F specific antibody that targets antigenic Site Ø at a concentration of 0.02 μg/mL (100 μL/well).
Post-F (His Tag) is not recognized by the mentioned antibody at low concentrations (routinely tested).

· Pre-F特异性抗体（识别位点Ⅴ）验证数据

Immobilized Pre-F protein binds to a pre-F specific antibody targeting antigenic Site V at a concentration of 0.05 μg/mL (100 μL/well).
Post-F (His Tag) is not recognized by the mentioned antibody at low concentrations (routinely tested).

· Pre-F特异性抗体（识别Quaternary-Dependent）验证数据

Immobilized Pre-F protein binds to a pre-F specific antibody that targets a quaternary-dependent epitope at a concentration of 0.2 μg/mL (100 μL/well).
Post-F (His Tag) is not recognized by the mentioned antibody at low concentrations (routinely tested).

· 融合前后构象均识别抗体（识别位点II）验证数据

Immobilized Pre-F protein, along with Post-F binds to an RSV-specific antibody that targets antigenic Site II (routinely tested)at a concentration of 0.015 μg/mL (100 μL/well).

【参考文献】

1. Thomas Williams, et al. Results from the second WHO external quality assessment for the molecular detection of respiratory syncytial virus, 2019-2020.

2. Drysdal, et al. Priorities for developing respiratory syncytial virus vaccines in different target populations. Sci. Transl. Med. 2020

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4. Lan Zhang, et al. Design and characterization of a fusion glycoprotein vaccine for Respiratory Syncytial Virus with improved stability. Vaccine. 2018

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