生物医学信号检测与处理3——生物传感器——酶联免疫吸附分析法ELISA（三种）+3免疫传感器——第三次课学习笔记

1 课程重点概况

4月6日（周二）第三次课的重点内容：
1、重点掌握三种常见的ELISA方法的原理，这是后期免疫传感器的基础，务必牢牢掌握。再重点强调一下，双抗体夹心法只能用于检测生物大分子；而小分子因其分子小、结合位点有限，不能被两个抗体同时识别，不能用双抗体夹心法实现检测。
2、电化学免疫传感器的原理。
3、电化学免疫传感器中识别元件（抗体或核酸适配体）的固定方法：了解核酸适配体作为识别分子的主要特征，包括核酸适配体是单链DNA（或RNA）、核酸适配体末端可以修饰巯基、生物素等，通过Au-s或生物素-亲和素（或链霉亲和素）特异性相互作用，达到固定的目的。
4、结合具体的应用实例，能看懂别人设计的传感器原理，同时也要做到针对给定的检测对象和识别分子，能设计出电化学传感器；
5、举例说明电化学传感器中如何提高检测灵敏度？

2 重点内容梳理

2.1 三种常见的ELISA方法的原理

这是后期免疫传感器的基础，务必牢牢掌握。再重点强调一下，双抗体夹心法只能用于检测生物大分子；而小分子因其分子小、结合位点有限，不能被两个抗体同时识别，不能用双抗体夹心法实现检测。

2.1.1 双抗体夹心法测抗原

2.1.2 间接法测抗体

2.1.3 竞争法测抗原

2.2 电化学免疫传感器的原理

免疫传感器（immunosensor）的基本原理是免疫反应，它利用固定化抗体（或抗原）与其相应的抗原（或抗体）发生的特异性结合，使传感器上生化敏感膜的特性发生变化。

2.3电化学免疫传感器中识别元件（抗体或核酸适配体）的固定方法

了解核酸适配体作为识别分子的主要特征，包括核酸适配体是单链DNA（或RNA）、核酸适配体末端可以修饰巯基、生物素等，通过Au-s或生物素-亲和素（或链霉亲和素）特异性相互作用，达到固定的目的。

2.3.1 生物素-亲和素体系和自组装单层膜

针对免疫传感器的特殊性，除吸附法等直接固定方法外，生物素-亲和素体系（biotin-avidin system，BAS）和自组装单层膜（self-assembled monolayer，SAM）则属于间接固定的方法，这些方法采用中间连接层（如硫醇、亲和素等）来连接传感器表面与抗体。

2.3.2 戊二醛交联

戊二醇是一个常用的双功能基试剂，很容易使蛋白质交联，这种交联是通过蛋白质中赖氨酸残基进行的。

2.3.3 蛋白A共价连接

蛋白A（protein A）是金黄色葡萄球菌的一种胞壁成分，分子中有四个与免疫球蛋白分子Fc片段结合的位点。

2.4 电化学传感器的具体应用实例

电化学免疫传感器是由免疫分子识别系统与电化学转换器组合而成。是一种将电化学分析方法与免疫学技术相结合，利用抗原/抗体作为分子识别元件，与电化学传感元件直接接触，并通过传感元件把某种或某类待测物质的浓度信号转变为相应的电信号的生物传感器类型。

相应的检测信号可分为电位型、电流型、电导型和电容型。

这类传感器的特点：快速、灵敏、选择性高、操作简便。

具体实例要看看老师课件里的几个例子。

2.4.1 直接型

2.4.2 间接型

2.5 举例说明电化学传感器中如何提高检测灵敏度