免疫学检验基础

学习免疫检验几年了，有收获，有未知，记录学习过程，查漏补缺。

定义：

1.抗原：可诱导机体免疫系统产生免疫应答的物质。

2.抗体：由机体免疫系统产生，可特异性结合某种物质的免疫球蛋白（并非所有免疫球蛋白都是抗体）。分IgG、 IgM、 IgE、 IgA、 IgD五个亚型。

3.免疫检验：利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法。

4.免疫标记技术：用荧光素、酶、放射性同位素或电子致密物质等标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应，通过这些标记物质的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质或者含量。

一、检验基本原理

        利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法。

        酶联免疫吸附(ELISA) ：ELISA实验是采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量/定性测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。    

①抗原/抗体结合物能与HRP酶进行连接形成复合物1，且比较稳定；    

②复合物1会被固相支持物（磁珠）捕获，且比较稳定 ；    

③清洗，去除游离的HRP酶；    

④复合物1中HRP酶与底物混合，反应发光

ELISA技术类型：

        夹心法：可用于测定抗原，也可用于测定抗体。用特异性抗原/抗体进行包被和制备酶结合物。双抗体夹心法测抗原、双抗原夹心法测抗体 与夹心法反应曲线类似还有间接法/俘获法（二抗）。

                      

        竞争法：可用于测定抗原，也可用于测定抗体。以测定抗原为例，受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合，因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量成反比。

                      

抗原抗体反应的特性：

1.特异性     抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间。化学结构和空间构型互补关系，具有高度的特异性。

2.可逆性     抗原抗体结合形成复合物后，在一定条件下又可解离恢复为抗原与抗体的特性。     ①Ag（抗体）+Ab（抗原）→Ag·Ab（抗原抗体复合物）    ②Ag·Ab→Ag+Ab

3 .比例性     抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系，只有当二者浓度比例适当时才出现可见反应，在抗原抗体比例相当或抗原稍过剩的情况下，反应最彻底，形成的免疫复合物沉淀最多、最大。

 

二、常见的测量方法

大概分类方向，并发绝对分类：

 

1.免疫分析法     利用抗体与抗原的特异性反应，并结合生物标记，可对待测物质进行定量定性分析。    

2.生物传感器     用生物传感器中的敏感膜与待测物质反应，可通过显示器反映有效成分的含量。

3.光谱法  

   3.1.吸收光谱法：  

      1）直接测定法：待测物配置成一定浓度的溶液，移至分光光度计，读取吸光度。  

      2）比色法（间接法）：将待测物与相关试剂或酶的底物作用后，移至分光光度计，读取吸光度。

   3.2.荧光光谱法：激发光激发待测物质发射发射光，读取荧光强度。  

   3.3.浊度法：极稀的悬浮液采用此法，测定悬浮液在不被吸收的波长下表现的消光值。

4.电化学法：有些反应可放出质子氢，可用PH计或NAOH滴定等方法追踪变化计算出待测物的含量。

5.生物活性检测法：细胞或动物摄入待测物质后，待测物质摄入量与细胞或动物的生理指标变化有相关性，以此检测待测物质含量。

6.电泳法：利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。在确定的条件下，带电粒子在单位电场强度作用下，单位时间内移动的距离（即迁移率）为常数，是该带电粒子的物化特征性常数。不同带电粒子因所带电荷不同，或虽所带电荷相同但荷质比不同，在同一电场中电泳，经一定时间后，由于移动距离不同而相互分离。分开的距离与外加电场的电压与电泳时间成正比。

三、一些常用概念：

阳性（positive, P）：在给定的测量方法和判定标准下，被测物真实存在且测量结果也为存在的结果称为阳性。

假阳性（false positive） ：在给定的测量方法和判定标准下，被测物真实不存在但测量结果为存在的结果称为假阳性。    表述阳性时，测量方法、测量对象和适用范围一定要具体。eg:HCV抗原阳性；HCV抗体阳性（可能是患者也可能不是患者）；此人HCV RNA阳性；

阴性（Negative, N）：在给定的测量方法和判定标准下，被测物真实不存在且测量结果为不存在的结果称为阴性。

假阴性（false Negative）：在给定的测量方法和判定标准下，被测物真实存在但测量结果为不存在的结果称为阴性。    测量方法、测量对象和适用范围一定要具体

符合性：

20220822，先写到这，未完待续...