脑类器官培养从“收货”开始：一份实用的试剂处理与操作指南

📦 收到试剂之后该做什么？

收到试剂并不是简单地“冰箱一放”就完事了。正确的保存条件，关系到后续细胞活性与培养成功率。

1. 脑类器官培养基 A

• 保存温度：4 ℃

• 保质期：3 个月

• 建议：尽量在1个月内使用完毕

• 长期不用时：可转存于 -20 ℃，但避免超过2次反复冻融

2. 组织保存液 E & 原代组织消化液 C

这两种试剂中富含细胞活性相关的营养成分，对细胞的预处理与消化至关重要。

• 保存建议：如短期内不使用，推荐存放于 -20 ℃

• 重要提示：避免反复冻融超过2次，以免活性下降

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🧪 类器官培养之前的组织准备：越早做对，越少返工

组织的前处理在类器官实验中容易被忽视，但却是影响最终成败的关键因素。

Step 1：实验材料准备

提前准备以下材料，可节省操作时间并提升实验稳定性：

• 原代缓冲液 B（预冷至 4 ℃）

• 组织保存液 E

• 取样管、运输箱、冰袋等运输工具

Step 2：组织的获取与运输

• 时间敏感性强：组织应在离体后 30分钟内 尽快置入组织保存液 E

• 清洗流程：使用原代缓冲液 B 清洗组织表面血液 3-5 次

• 运输条件：将组织保存在 4 ℃条件下，72 小时内运输完成

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🧬 脑类器官原代培养流程（以24孔板为例）

接下来是实验操作的核心部分——类器官的构建。

所需材料清单

确保以下材料状态合适：

• 原代缓冲液 B（4 ℃）

• 原代组织消化液 C（预热至 37 ℃）

• 融化好的基质胶（提前24小时放入 4 ℃冰箱）

• 脑类器官培养基 A（室温或 37 ℃）

• 其他器材：剪刀、移液枪、培养皿、细胞筛等

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🧠 脑类器官构建步骤详解

1. 组织清洗

• 将组织从取样管中转入培养皿，使用原代缓冲液 B 反复吹打清洗3次以上

• 目的：去除血液及表面杂质，提升细胞纯度和后续消化效果

2. 组织解离与酶消化

• 使用眼科剪或手术刀片清除脂肪或杂质

• 机械切割成 1–3 mm³ 的小块，转移至15 mL EP管中

• 加入 6 mL 原代组织消化液 C，在 37 ℃ 条件下震荡消化 20–25 分钟

• 每10分钟观察一次：判断组织是否充分解离

  • 判断标准：观察到较多小于 70 μm 的细胞团或单个细胞，即可进入下一步

💡 提示：
若样本较少（如活检样本），可将组织放入1.5 mL EP管中，使用1 mL消化液进行处理。

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✅ 小结：做好准备，让类器官培养更高效

脑类器官构建是一个精密而系统的过程，任何一个环节的细节疏忽都可能导致实验失败。本文从试剂的收货、保存，到前处理与消化步骤，力求为研究者提供一套稳定、实用的技术参考。

记住：类器官实验，从你打开快递箱的那一刻就已经开始。