Di 属于长链二烷基碳菁类染料,因其独特的结构使其具有极强亲脂性,可与脂溶性生物结构结合,在一定浓度下,可以对细胞膜进行完全染色。Di 染料被激发后具有很高的淬灭系数和激发态寿命,在细胞与组织定位示踪中起到了极大作用。
常见 Di 染料
常见的 Di 染料包括 DiO、DiI、DiD、DiR,在被激发后形成不同颜色的荧光 (如图 1)。
图 1. DiO、DiI、DiD、DiR 光谱图
■ DiO 染色为例,简要抛出体外实验步骤
a)接种适量数目的细胞,37°C 培养过夜。
b)去除培养基,离心收集细胞,加入 PBS 洗涤 2-3 次,每次 5 分钟。
c)加入对应浓度 DiO 工作液 (5-10 μM),室温孵育 30 分钟。
d)400 g,4℃ 离心 3-4 分钟,弃去上清。再次加入 PBS 洗涤细胞 2-3 次,以充分去除未进入细胞内的DiO。
f)用无血清培养基或 PBS 重悬细胞后,在荧光显微镜或流式细胞仪下检测。