描述:
将生物素(biotin)标记到转铁蛋白上是一种常用的方法,用于生物分析和免疫检测。生物素标记的转铁蛋白可以用于生物素-双抗体夹心法检测铁蛋白在生物样本中的存在和水平。以下是一般的标记步骤:
材料准备
- 转铁蛋白:*的转铁蛋白,确保其纯度和活性。
- 生物素-NHS:生物素和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)偶联的混合物。
- 磷酸盐缓冲液(PBS):用于制备标记反应的缓冲液。
- 其他试剂和耗材:如透析袋、搅拌器等。
标记步骤
- 准备转铁蛋白溶液:将转铁蛋白溶解在PBS缓冲液中,确保其浓度适合标记反应。
- 制备生物素-NHS溶液:将生物素-NHS溶解在适量的溶剂中,制备成适当浓度的溶液。
- 标记反应:将适量的生物素-NHS溶液缓慢加入到转铁蛋白溶液中,同时轻轻搅拌。
- 孵育:在室温下孵育一段时间,通常为1-2小时,以促进生物素与转铁蛋白的结合。
- 去除未反应的生物素-NHS:使用透析袋或凝胶过滤柱去除未反应的生物素-NHS。
- 纯度和活性检测:检测标记后的生物素-转铁蛋白的纯度和活性,确保其可以用于后续实验。
应用和保存
标记后的生物素-转铁蛋白可用于生物素-双抗体夹心法检测铁蛋白在生物样本中的存在和水平。存储时应避光、冷藏保存,以保持其稳定性和活性。这种方法可以用于研究铁蛋白在细胞和组织中的分布和功能,以及铁代谢相关疾病的诊断和*方法的开发。
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