AbMole科研快报-IGF2BP2通过m6A增强LincRNA01116的稳定性

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本期与您分享的是：IGF2BP2通过m6A增强LincRNA01116的稳定性：m6A是子痫前期患者的潜在生物标志物和治疗靶点。

子痫前期（PE）是一种以胎盘重构失败为特征的严重并发症，是导致胎盘结构和功能改变的主要原因之一。长链非编码RNA的异常表达与PE的发生和发展有关。本研究发现，linc01116在PE患者中表达显著下调，与子宫螺旋动脉重构不良有关。在体外和体内，敲低linc01116显著降低滋养细胞的血管生成。在机制上，IGF2BP2通过m6A甲基化调节linc01116 RNA的稳定性。生物信息学和其他实验进一步揭示了linc01116通过吸附miR-210-3p在滋养细胞中上调AAMP的表达。

综上所述，本研究揭示了linc01116在调节滋养细胞血管生成中的关键作用。此外，本研究为PE的胎盘病理检测提供了新的线索。

Actinomycin D（Abmole，M4881，纯度>99%）（https://www.abmole.cn/products/actinomycin-d.html）是一种从土壤细菌中分离出来的多肽抗生素。

FIGURE 3 The effect of IGF2BP2 on linc01116 stability and vascularization, migration, and invasion of trophoblasts in vitro.

表观遗传调控的最新进展揭示了m6A和lncRNA修饰之间的联系。m6A修饰的“阅读器”蛋白在调节甲基化mRNA的命运中起着关键作用。多项研究表明PE胎盘组织中m6A甲基化水平异常升高，因此本研究旨在建立m6A的变化与PE中linc01116低表达之间的关系。

根据在线数据库ENCORI（https://starbase.sysu.edu.cn/）中的数据，linc01116可以绑定IGF2BP2和YTHDF1（图3A）。SRAMP数据库（http://www.cuilab.cn/sramp/）中的在线生物信息学数据揭示了linc01116中潜在的m6A甲基化位点。

研究人员对linc01116与m6A“阅读器”蛋白的结合情况进行了研究，证实了linc01116与IGF2BP2的结合比YTHDF1更强（图3B）。IGF2BP2作为m6A的“读取器”，主要稳定RNA23，使用放线菌素D阻断细胞RNA转录，发现HTR-8/SVneo细胞中IGF2BP2的敲低显著缩短了linc01116的半衰期（图3C）。上述实验表明，linc01116-结合蛋白IGF2BP2维持了mRNA的稳定性。

此外，MeRIP-qPCR分析显示，抗m6A抗体在linc01116的200-300bp片段中高度富集（图3D），而抗m6A抗体在linc01116的200-300bp片段中高度富集（图3E）。这些发现表明IGF2BP2通过m6A依赖的方式增强linc01116 RNA的稳定性。

此外，5个配对胎盘样本中IGF2BP2的免疫组化染色（图3F）和western blot分析结果（图3G）显示，PE中IGF2BP2的表达水平下调，与RT-qPCR分析结果一致（图3H）。

随后，我们评估了IGF2BP2对滋养细胞的影响，包括网络形成能力、迁移和侵袭能力。与其他三种细胞系相比，HTR-8/SVneo中IGF2BP2 mRNA的表达明显高（图3I）。因此，我们选择si-IGF2BP2-1#和si-IGF2BP2-3#进行后续实验（图3J）。用siRNA抑制IGF2BP2表达可减少HTR-8/SVneo和HUVECs形成的网状结构（图3K）。

总之，这些发现表明IGF2BP2的沉默抑制了HTR-8/SVneo和HUVECs的侵袭和迁移（图3L）。因此，IGF2BP2敲低会干扰滋养层细胞和HUVECs细胞的侵袭、迁移和网络形成。PE胎盘组织IGF2BP2下调通过m6A修饰增加linc01116的降解，抑制滋养细胞的血管生成。

FIGURE 6 The effects of IGF2BP2 on the stability and transcription of AAMP mRNA.

m6A修饰是人类mRNA中最常见的修饰。根据生物信息学SRAMP数据库（http://www.cuilab.cn/sramp/）的数据，AAMP mRNA潜力具有m6A甲基化位点（图6A）。RIP实验表明IGF2BP2可以与AAMP mRNA结合（图6B）。

此外，与对照组相比，si-IGF2BP2-感染HTR-8/SVneo细胞中AAMP的mRNA（图6C）和蛋白（图6D）水平随着时间的推移而下降。尽管如此，MeRIP-qPCR分析显示，m6A仅在AAMP mRNA的1380-1538 bp片段中高度富集（图6E）。然而，IGF2BP2在预测位点内并未富集（图6F）。

综上所述，这些结果表明IGF2BP2可以提高AAMP mRNA的稳定性，但可能不会促进m6A修饰。

鸣谢：AbMole生物

Tingting Zhang, et al. J Cell Biochem. 2023 Feb;124(2):239-253.