AbMole科研快报-空间上不同的THY1阳性细胞的亚克隆进化和扩增与胶质母细胞瘤的复发有关

胶质母细胞瘤（GBM）是一种以复发不可避免为特征的致死性疾病。在这里，我们研究介导耐药性的分子途径，以确定新的治疗机会。实验开发了一个纵向体内复发模型，利用外植体在替莫唑胺（TMZ）和放射（IR）治疗后产生配对标本（复发前和复发后）。评估这些标本的治疗反应，并确定驱动治疗耐药性的基因表达途径。使用人类GBMs的空间转录组学对研究结果进行了临床验证。

结果：这些研究在重复队列中揭示了复发时间充质和茎样基因上调的基因表达谱。分析显示，这种转录谱与较差的总生存率和复发时的上调有显著关联。值得注意的是，基因表达分析发现TGFβ信号上调，复发时THY1水平增加了100多倍。此外，在首次治疗肿瘤中，THY1阳性细胞小于细胞总数的10%，而在复发肿瘤中，这一比例为75-96%。然后，我们从首次治疗肿瘤患者样本中分离出THY1阳性细胞，并确定它们在原位模型中固有地抵抗放化疗。

此外，利用首次治疗肿瘤人类GBM的图像引导活检，我们进行了空间转录组分析。这揭示了罕见的以间充质/茎样基因表达为特征的THY1+区域，类似于我们的复发小鼠模型，它与血管周围生态位内的巨噬细胞共定位。然后，我们在体内抑制TGFBRI活性，从而降低间充质/茎样蛋白水平，包括THY1，并恢复复发肿瘤对TMZ/IR的敏感性。

结论：这些研究结果表明，GBM复发可能是由于血管周围生态位中已有的、治疗抵抗的THY1阳性的间充质细胞重新聚集所致。

AbMole（http://www.abmole.cn/）精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。

LY2109761（Abmole，M2081，纯度>98%）是一种新型的，选择性的TGF-β receptor type I/II （TβRI/II）双重抑制剂，Ki分别为38 nM和300 nM，对Smad2的磷酸化产生负面影响。
https://www.abmole.cn/products/ly2109761.html

Fig. 3. Analyses of paired samples reveals development of a therapeutic resistant phenotype with a mesenchymal gene expression pattern that is reversed with TGFβinhibition.

为了探索与细胞粘附、间质上皮和干细胞表型相关的基因在TMZ/IR耐药中的作用，我们首先验证了从RNAseq分析中选择的基因（ZEB2、VCAN、CDK6、THY1、GLI2、SOX2），这些基因之前与GBM的治疗阻抗相关。定量PCR分析证实，与初次治疗组相比，所有四种复发肿瘤样本中的ZEB2、VCAN、CDK6、THY1、GLI2和SOX2 mRNA水平均上调（图3A,B）。Western blot分析证实，与未处理的样本相比，大多数复发样本中这些基因的蛋白水平也有所增加（图3C,D）。CD133细胞表面表位（胶质瘤干细胞性的标志）的表达在4个复发肿瘤中的3个中也显著升高（图3B）。

PDX系衍生的患者也有治疗后复发，该复发被切除并可从TCGA（TCGA 06-0190）中进行比较分析。配对的预处理和复发标本的Hallmark通路富集分析显示，上皮细胞向间充质细胞的转变是复发时最显著的上调通路。随后，我们进行了一项Ingenuity通路分析，发现TGFβ通路是复发时基因表达变化的最显著上游调控因子。TGFβ通路是上皮细胞向间质转化的主要调控因子。对该患者特异性间充质通路基因的评估也揭示了我们之前在复发小鼠模型研究中发现的基因上调，包括TGFβ1、THY1、VCAN、TGFβ2、GLI2和ZEB2（图3E）。

由于临床前和临床结果直接表明TGFβ信号通路与复发有关，因此我们使用TGFβR1丝氨酸苏氨酸激酶抑制剂来评估这种关联的意义。将治疗前（P2）和复发肿瘤（R1）的侧腹肿瘤动物随机分为4组：1）对照组（未治疗），2）TMZ/IR治疗，3）单独使用TGF훽抑制剂（LY2109761）治疗，4）TMZ/IR和LY2109761联合治疗。Western blot分析未治疗的肿瘤样本（P2和R1）以及治疗过的复发肿瘤样本（RT1-5）显示，与未治疗的复发肿瘤相比，LY2109761治疗的肿瘤导致THY1、ZEB2、CDK6、SOX2和GLI2的水平降低（图3F）。

此外，在接受TMZ/IR和LY2109761同时治疗的肿瘤中，这些间质mal/stem表型的标志物也下调。这些发现表明LY2109761与我们的GBM模型中预期的一样，适当地靶向感兴趣的途径。

LY2109761单药治疗没有显著减缓肿瘤生长（图3G）。然而，与单独TMZ/IR治疗相比，LY2109761联合TMZ/IR显著降低肿瘤生长。虽然差异不显著，表明联合可能没有协同作用，但有明显的加性效应。结合我们的蛋白表达分析和患者匹配样本的上游途径分析，这些发现表明TGFβ介导的间充质和茎样基因表达谱的激活促进了对TMZ/IR的抗性，TGFβ抑制下调间充质和茎样表型，恢复对TMZ/IR的敏感性。

鸣谢：https://www.abmole.cn/

Wajd N Al-Holou, et al. Neoplasia. 2023 Feb;36:100872.