PD-L1检测抗体和检测结果判读

检测抗体

IHC是利用抗原与抗体特异性结合，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来对组织细胞抗原进行定位、定性及相对定量的方法。现在已有22C3、28-8、SP142、SP263已经获得美国食品药品监督管理局（Food and Drug Administration, FDA）批准应用于临床。22C3与28-8对应Dako诊断平台，前者的阳性标准规定≥1%肿瘤细胞染色为阳性，≥50%肿瘤细胞染色为强阳性，后者阳性标准是≥1%肿瘤细胞染色。而SP142与SP263对应Ventana诊断平台，前者阳性标准是≥10%肿瘤和（或）肿瘤浸润性免疫细胞染色，后者是≥25%肿瘤细胞染色。此外，还存在实验室检测抗体，如E1L3N。

近几年，国际上对于不同抗体检测的一致性研究已有不少报道。美国学者对90例NSCLC手术切除标本分别用22C3、28-8、SP142和E1L3N检测肿瘤细胞和免疫细胞的PD-L1表达情况，由13位病理学家评估染色百分比。结果显示，采用SP142抗体在肿瘤细胞和免疫细胞中检测到的PD-L1明显减少，不同抗体检测到的肿瘤细胞评分的一致性为0.813（95%CI: 0.815-0.839），而免疫细胞评分的一致性为0.277（95%CI: 0.222 -0.334）[18]。2016年德国进行了一项比较22C3、28-8、SP142和SP263在肺腺癌和鳞癌的染色模式研究，在15例手术切除标本的染色中，采用28-8和22C3单抗染色的标本中肿瘤细胞染色比例相似，相比之下，SP142在4例标本中的肿瘤细胞染色较少，SP263在9例标本中显示了更多的肿瘤细胞染色比例[19]。2017年同样评估这4种抗体一致性的蓝印计划（The Blueprint Project）开展，39例NSCLC标本的实验结果表明了当使用22C3、28-8和SP263分析时，染色的肿瘤细胞百分比是可比的，而SP142的检测结果显示染色的肿瘤细胞整体较少[20]。德国一致性研究和蓝印计划在SP263同22C3、28-8单抗的可比性结论上有所出入，可能是样本量过少引起。同年，Ratcliffe等[21]用22C3、28-8和SP263分别检测500个NSCLC的存档标本，设定肿瘤细胞胞膜阳性染色百分比包括1%、10%、25%和50%多个截断值作为PD-L1阳性标准，不同单抗之间的总体符合率均>90%。另外，对于以E1L3N为代表的实验室检测抗体的争议仍存在，不同研究阐明的一致性变异大[22,23]，有待日后更多的研究加以改进和论证。综合以上结果可以发现，22C3、28-8和SP263的检测结果具有相似的肿瘤细胞阳性百分比，一致性较高，而SP142染色阳性的肿瘤细胞较少。由此，我们可以推定22C3、28-8和SP263单抗对肿瘤细胞的染色结果具有可交换性，意味着其在未来的临床应用上将有较大潜力。

检测结果判读

IHC的结果判读主要通过人为定性或半定量，有一定的主观性。所以国际上存在共识，需要设立专门的实验室和要求病理学家具备足够的经验。尤其目前不同药物之间截断值不一，病理学家们在日常实践中更应该反复熟悉各种PD-L1截断值的参考图像。基于人工判读的现状，我国学者提出应用计算机辅助图像分析技术进行精确定量的判读方法[24]。计算机采集每个切片的5个视野图像，计算染色程度比值[（棕色区域面密度/蓝色区域面密度)×棕色平均光密度]，将空白对照片的比值定义为阈值，与人工判读（阳性强度×阳性细胞百分数）比较109例肺腺癌中PD-L1的阳性结果，发现一致率为88.073%。可以发现，图像分析技术和人工判读的一致性较好，并且前者更具客观性。