RACE的种类、特点及其原理
实际实验中有时候只知道mrna的一部分序列而不知其全长序列,造成了一些苦恼,而1988年Frohman报道RACE技术可以解决此问题。
RACE也可以称为cDNA 末端快速扩增技术(Rapid Amplification of cDNA Ends),是一种对mRNA进行末端快速扩增的技术,可从样本中快速扩增 cDNA 的 5′端及 3′端的技术。
随着技术不断的发展,从1985年至今,RACE技术经过不断的改进从而有了好几种RACE技术,常见的包括:
经典RACE、Adapter-Ligated RACE、RLM-RACE、Cap-switching RACE、环形RACE、T-RACE等……
这些RACE技术各有特点,下面给大家分别介绍一下:经典RACE
根据克隆RNA的位置,可以分为cDNA 3’末端快速扩增(3’ RACE)和cDNA 5’末端快速扩增(5’ RACE)。3’ RACE
真核生物mRNA的3’末端存在poly A(多聚腺嘌呤核苷酸),根据此结构对目的mRNA的3’进行扩增的技术原理流程图可见图1。
图1 3’RACE的技术原理流程图5’ RACE
因为mRNA 的3’有特殊结构,而5’没有特殊结构,所以 5’ RACE和3’ RACE有所不同,5’进行扩增的技术原理流程图可见图2。
图2 5’ RACE的技术原理流程图
经典RACE可以扩增RNA,但是对模板结构的要求高,同时因为原核生物的mRNA不具备polyA尾巴结构,