液基细胞学加计算机阅片,细胞学实验室 - foliagetx博客 - 华夏病理网博客

Magee医院的细胞学实验室的主要工作是制备妇科的液基细胞学(ThinPrep)、腹水、腹腔冲洗液、细针穿刺和HPV检测。

宫颈脱落细胞学的量每天在300多张，有两台T3000全自动的细胞制备仪。非妇科标本由于少，所以用T2000机器，制备涂片的过程没有什么特别，关键在于细胞的染色上。由于要满足电脑阅片的需要，染色效果非常好，给正确诊断提供了良好的保证。染色也是用自动染色机完成的，是樱花染色机。但如果真正要染好还是要下一翻工夫的。

染色液全都是ThinPrep原厂的，苏木素过滤后使用。其它都是直接使用。每染4架(40张切片一架)更换95%乙醇和水；每8架更换所有乙醇和水，并过滤苏木素一次；每12架再换所有乙醇和水；16架则全部换新。这可能有些浪费，而且每次换完试剂都需要做QC，QC就是一整架40张，其实更换一次试剂只能做3架细胞即120张。这样做的目的有二：染色效果好；减少交叉污染。

今天是更换所有试剂的日子，有幸看了Mr. Lynn更换试剂，才知道切片质量的保证和每一个具体的细节息息相关的。所有的试剂都需要回收，分为醇类和染液放一起，二甲苯另外一瓶。二甲苯的盒子和最后几缸100%乙醇盒子是用吸水纸擦拭的。其它的是用水洗的，清洗时会用到漂白水Bleach water (ThinPrep 1：1稀释后使用)，用刷子刷干净后用龙头接一个小橡皮管冲，让水自然溢出来，这样残留的细胞会自己漂浮出来。如果倾倒的话，细胞还是会粘在壁上。冲洗完倒置在吸水垫上待用。所有开封的试剂会记录开封日期、并在日志本上记录染液的产品批号。更换完毕随即做一架40张的QC片子，不过细胞技术员只会选择其中的4张切片，记录核染色和浆染色的情况。整个更换试剂的过程用时40分钟左右，因为我不是专门做技术的，只是提供技术员参考一下。

另外，针对我自己医院的液基细胞经常会在盖玻片下出现气泡，我特意关心了一下，这里是用樱花的封片机，用的是一种FILM的塑料质地的盖玻片，只需要二甲苯作封片剂，可能二甲苯让塑料盖玻片稍稍融化了，与细胞之间就贴地非常紧密了。他们比较过会比玻璃盖玻片好。

今天还看了腹冲液标本的制备。常规核对标本和申请单。离心，一般腹冲液细胞很少，所以所有的送检标本都离心了。一般分成若干管，其中3支各15ml用于做细胞涂片，其余的做细胞蜡块，但有时标本很少，则优先保证细胞蜡块而减少涂片的张数。离心后倒去上清。先做涂片。制备也很有讲究，棉签先用生理盐水浸湿，再去蘸沉淀，这样就不会把细胞吸进去了，共做两张，一张涂完立即用95%乙醇固定，另一张立即滴一滴甲苯胺蓝，加盖玻片，立即可以读片，目的是大致看一下是否是恶性的。如果怀疑是恶性的细胞学，则染色会手工制备，而且做完后就会更换所有试剂，以避免交叉污染。另一支15ML的加ThinPrep的固定液，再倒回ThinPrep的瓶子里，做液基细胞学；还有一支15ML的用于Cytospin，是另一种液基细胞学方法，细胞沉淀加在小管子里，底下有一个通道，用一层滤膜与载玻片间隔开，通过离心，将细胞铺在载玻片上，细胞的铺的范围很小，1CM不到，因为怕TCT的圈太大，细胞太小，用这个方法细胞密度会很大，但有时样本细胞多时，这种方法会过密了，所以和TCT、普通涂片同时做，能保证至少有一张是最完美的。

因为我们做细胞蜡块总是不大理想，细胞量太少。而这里的切片质量非常好，这一直是我最关心的。首先是把几管细胞全集中在一个管子里，加3滴血清(问检验科要的，因为美国检验科叫临床病理，是属于病理科的，所以很简单，病人检测标本剩下的就会送过来，一般存放4度不超过3天)，再加凝血酶3滴，放置一会就反应产生纤维蛋白就会凝成胶冻样。到此还不行，胶冻过大，细胞的密度还不够，因此，再在吸水垫上铺上一层擦镜纸，加少许生理盐水浸湿，用竹棒挑出胶冻，在纸上来回滚动，则会把过多的水份吸去，最终会形成非常完美的小细胞团，至此大功告成，常规脱水、包埋切片。

所以，高水平细胞学的诊断是多方面努力的结果。首先是态度上重视，细胞学诊断是病理诊断中的非常重要的组成部分，而且是体现在肿瘤的早期预防阶段，对降低总体宫颈癌的发病率、减少对病人因患癌所造成的痛苦是功不可没的。所以美国有很多专门从事细胞病理学的医生、细胞技术员(初筛)，还有专门培养细胞技术员的学校。其次是有强大的经济支持，上海一例TCT是150元；而这里大概是100美元吧，而且所有的试剂、仪器都是本地的，成本还会便宜不少；以及良好的质控(这个放在以后说)。

最后简单看了一下Cervista HPV的检测，因为都是用机器做的，也就没有更多特别的。主要是在报告上，因为Cervista的结果输出的是将HPV分为3个亚类，分别报告阴阳性，但在最终的报告中，这里是不分的，只有总的阴阳性。如果3个亚类都阳性，则会重新复核一遍；如果出现CV值偏大而导致报告错误，则考虑可能是DNA样本管中的气泡产生的，会单独再用类似于分光光度计的仪器读取结果，一般会改善。如果是低DNA浓度错误，则不重复做，报告中提示重新取样。如果HPV阳性而细胞学阴性的样本，会进一步做基因分型(genotyping)，因为标本量相对少，就会手工做，试剂还是Cervista的。

染色液更换的常规(-OH指所有的乙醇，QC是质控，下面的小字是SAKURA的机器设置)

2. 技术员在擦拭二甲苯缸，任何的细节都会反映在最终的染色结果上

3. 清洗后更换所有的试剂，机器像新的一样。盒子外面看不到一点染料的颜色。

4. 细胞学的封片机(左面瓶子里是二甲苯，右边圈是FILM，即塑料质地的盖玻片，因为是软的，所以是一个卷，贴上后会自动切断。

5. 用于细胞蜡块的凝血酶，品牌是Recothrom。

6. 用于细胞蜡块制备的血清，来自病人

7. cytospin的装置。

8. 不是让大家看垃圾桶，是制备好的cytospin的片子(没对好焦)

9. 小红点就是做好的细胞团，底下是吸水纸是一层擦镜纸。

10. Cervista HPV检测仪

11. 用于CervistaHPV检测的自动加样仪，将瓶子里的样本加到多孔板里，供上面的检测仪用。