实验总结_免疫荧光实验需要特别关注的细节总结

7月中旬本公众号发表了小六儿总结免疫荧光新手攻略( 新手细胞免疫荧光实验常见问题解答 )，从细胞密度(铺板密度、方式、种板时间)及一抗选择及处理，DAPI及封片过程总结了新手掌握免疫荧光实验的基本准则。其核心注意事项总结如下 ： 1、明确蛋白定位，了解及预测蛋白表达； 2、细胞爬片时的密度及种板方法； 3、一抗建议选择中间浓度，特异性高低很重要； 4、双标染色：应当将种属来源区分开，二抗的颜色也要区分开； 5、DAPI复染时间不宜过长； 6、细胞免疫荧光最好不封片，新手很容易在最后一步功亏一篑； 7、如果要观察时间梯度的变化，尽量不用一次性观察好几个时间组，一次只观察1-2组，不会影响荧光效果。   就如上新手进阶要点总结之后，笔者总结了一下免疫荧光需要特别关注的细节，以期作出更完美的图片效果。 1、了解及预测蛋白的定位 例如：下图使用肺动脉内皮细胞( BPAE )观察线粒体的显色，采用405nm，488nm，561nm的激光，100x NA 1.49 的物镜对细胞内线粒体的分布进行简单的观察，此图可见， 单纯的mito-tra