免疫荧光实验原理很简单,其实就是使用荧光二抗,并在荧光显微镜下采集图像,其它的和IHC或ICC区别不大。
但是,想要得到良好的结果却很难,大家经常会遇以下问题:
(1)目标蛋白的荧光很弱,导致组间差异并不明显,造成假阴性结果;
(2)蛋白荧光太强,甚至形成非特异性的标记,一些背景染色可能被误认为阳性区域,造成假阳性结果;
(3)DAPI染细胞核时,加入的试剂太多,造成高背景染色;
(4)组织切片预处理不当或采用石蜡切片,导致高背景染色;
(5)采集图像过程不当,导致原始图像不佳,直接影响后续半定量分析。
可以看出,无论是荧光太强或者太弱,都会造成免疫荧光实验结果差或者失败。绝对消除影响是做不到的,希望大家能认识到这一点。针对这些问题,我们只能尽可能地优化,减弱影响。
......
接下来,只讲干货