剪切caspase3_ANTI-CASPASE-3的应用

背景[1-3]

ANTI-CASPASE-3是一类可以特异性结合CASPASE-3的多克隆抗体，主要用于检测CASPASE-3的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

pro-caspase-3含有277个氨基酸残基，分子量约32kD，与ICE有30%同源性，与CED-3有35%同源性，是caspase家族中与CED-3同源性最高的，无论从结构同源性还是从底物特异性来看都与CED-3很相似，所以有人认为它是CED-3在哺乳动物中的同源蛋白。caspase-3的原结构域明显短于ICE，但蛋白酶活性中心和与结合底物有关的保守的氨基酸均与ICE一致。

pro-caspase-3在活化过程中从Asp28~Ser29和Asp175~Ser176两处被剪切，形成P17(29~175)和P10(182~277)两个片段，相当于ICE的P20和P10，两种亚基再组成活性形式的caspase-3。pro-caspase-3本身并没有催化活性，在活化时首先由颗粒酶B(GrzB)或caspase-10在D175剪切下小片段后它才被部分活化，随后则可进行下一步的自我催化。在剪切原结构域时可能还有其它caspase如ICE的参与。

caspase-3最主要的底物是多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP(poly(ADP-ribose)polymerase)，该酶与DNA修复、基因完整性监护有关。在细胞凋亡启动时，116kD的PARP在Asp216-Gly217之间被caspase-3剪切成31kD和85kD两个片段，使PARP中与DNA结合的两个锌指结构与羧基端的催化区域分离，不能发挥正常功能。结果使受PARP负调控影响的Ca2+/Mg2+依赖性核酸内切酶的活性增高，裂解核小体间的DNA，引起细胞凋亡。这种裂解过程可被caspase-3的特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO所抑制，但不能被CrmA抑制。

caspase-3还可以剪切U1-70K、DNA-PK、PKCd和PKCq。PKCd和PKCq都属于新型PKC(novel PKC,nPKC)，当被caspase-3剪切后，可以切除调节区域，而成为活性形式的PKC，另外实验还证明，过量表达PKCd和PKCq均可以引起细胞凋亡，说明它们都参与了细胞凋亡的诱导是CTL细胞杀伤机制的重要组成部分。

应用[4][5]

用于P38MAPK抑制剂对血管性痴呆大鼠海马细胞凋亡、Bcl-2、Caspase-3表达及其学习记忆能力的影响研究

通过观察血管性痴呆大鼠海马区p38MAPK磷酸化的变化,探讨p38MAPK在血管性痴呆发病机制中的作用,并利用p38MAPK抑制剂SB202190作为研究干预方式,血管性痴呆大鼠侧脑室注射SB202190抑制p38MAPK信号通路后,通过Western Blot蛋白印迹法、免疫荧光法和激光扫描共聚焦显微镜等技术观察血管性痴呆大鼠海马区神经元凋亡、Bcl-2和Caspase-3凋亡因子表达变化和大鼠学习记忆能力的改变,探讨p38MAPK信号通路对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响,并初步探讨其作用机制。

血管性痴呆大鼠模型的制备和P38MAPK抑制剂对血管性痴呆大鼠行为学测试的影响血管性痴呆(VD)是老年期痴呆的最常见重要病因之一,学习记忆功能作为大脑的高级神经生理活动,在临床及实验研究中成为了药物干预血管性痴呆动物的一项重要检测指标。

在学习记忆的高级神经活动中,动物海马回是最重要的中枢结构,其对缺血缺氧等损伤很敏感,特别是慢性脑低灌注损伤,实验已证实大脑的慢性缺血-再灌注可引起海马结构损伤最终导致学习、记忆功能受损。

慢性脑灌注不足是血管性痴呆发病的主要病因,故两血管法被公认是目前国内外进行血管性痴呆动物研究中较为经典的动物实验模型,假手术组只分离双侧颈总动脉并不结扎,作为两血管法VD模型的正常对照。

参考文献

[1]Transient focal cerebral ischemia induces long-term cognitive function deficit in an experimental ischemic stroke model[J].Wenjun Li,Renqi Huang,Ritu A.Shetty,Nopporn Thangthaeng,Ran Liu,Zhenglan Chen,Nathalie Sumien,Margaret Rutledge,Glenn H.Dillon,Fang Yuan,Michael J.Forster,James W.Simpkins,Shao-Hua Yang.Neurobiology of Disease.2013

[2]Mechanism of Activation in NMDA Receptors[J].Vasanthi Jayaraman,Anu Rambhadran.Biophysical Journal.2011(3)

[3]p38 MAPK and ERK1/2 dictate cell death/survival response to different pro-oxidant stimuli via p53 and Nrf2 in neuroblastoma cells SH-SY5Y[J].Giuseppe Filomeni,Sara Piccirillo,Giuseppe Rotilio,Maria R.Ciriolo.Biochemical Pharmacology.2012(10)

[4]Focal Adhesion Kinase Activates NF-κB via the ERK1/2 and p38MAPK Pathways in Amyloid-β25-35-Induced Apoptosis in PC12 Cells[J].Xichao Wang,Qun Chen,Da Xing.Journal of Alzheimer’s Disease.2012(1)

[5]杨申.P38MAPK抑制剂对血管性痴呆大鼠海马细胞凋亡、Bcl-2、Caspase-3表达及其学习记忆能力的影响[D].山东大学,2013.