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体内可见光光成像系统使用方法(以Xenogen IVIS 100系统为例)

体内可见光成像相对于其它的成像方法，成像过程简单，快速。

1，配制底物荧光素溶液和注射实验动物：

1）材料：D-荧光素 sciencelight Catalog# luc001

DPBS, W/O Mg2+, Ca2+

0.2um 针头滤器

注射器

2）新鲜配制15mg/ml荧光素DPBS溶液，过0.2um除菌滤器。

3）注射实验动物，用量为10 µl/g 体重，即150mg荧光素/kg体重。例如，对于10g体重小鼠，注射100ul，即1.5mg荧光素。

4）腹腔注射后10-15分钟后用成像系统观察。

注意事项：

l 荧光素溶液可先配制成200倍浓缩液置于-20℃保存，使用前稀释到15mg/ml。

l 对同一只小鼠来说，注射不同量的荧光素，发光强度不同，随着荧光素注射量的增多，发光增强。

l 一般来说，荧光素腹腔注射老鼠后约一分钟后表达荧光酶的细胞开始发光, 十分钟后强度达到最高。 在最高点持续约20-30 分钟后开始衰落, 约三小时后荧光素排除, 发光全部消失，所以最好的检测时间是在注射后15到25分钟之间.但需要注意的是，对于不同的动物模型，发光动力学过程并不完全一致，最好先进行预实验确定何时发光信号最强。

l 荧光素注射位置最好选在左下腹部，对于非刺激性溶液，小鼠可很好地耐受1ml。

2，麻醉实验动物

可采用异氟烷（isoflurane）或克他命/甲苯噻嗪（ketamine/xylazine）混合液麻醉实验动物。对于采用异氟烷麻醉动物，方法如下：

1) 称量异氟烷吸收过滤器的重量，看是否必要更换过滤器。当过滤器过重时，吸附物过多，应及时更换；

2）确保氧气供应已切断，将蒸发器面板调至“OFF”位置，向蒸发器腔内注入异氟烷，不要超过最大刻度指示线；。

3）打开氧气罐阀门，保证压力为55psi左右；

4) 将氧气流速调为1L/min；

5）将动物放入麻醉仓，盖好盖子；

6) 打开麻醉仓管道阀门（确保麻醉多支管阀门处于关闭状态）；

7）将蒸发器面板刻度调到3％（动物在1-2分钟后就会被麻醉）；

8）当动物对轻晃麻醉仓无反应时，将蒸发器面板刻度调到1.5-2％；

9）将麻醉多支管阀门打开。

10）迅速打开麻醉仓，取出实验动物，将圆锥吸入器套上。

11）关闭麻醉仓管道阀门。

12）开始进行成像操作或接种细胞。

注意事项：

l 一旦停止麻醉气体供应，动物会在几分钟内苏醒。

l 本麻醉系统仅适用异氟烷麻醉，使用其它麻醉剂可能会导致危险。

l 在处理剩余的麻醉剂时实验室要具备良好的通风条件，建议遵照已公布的安全条例进行操作。

l XGI麻醉系统要始终保持直立状态。

l 当成像或接种细胞结束后，关闭氧气阀和麻醉多支管装置阀门。

克他命/甲苯噻嗪（ketamine/xylazine）混合液麻醉方法：

1）将克他命（100mg/ml）和甲苯噻嗪（20mg/ml）按体积比4：1混合。

2）采用肌肉注射方式，克他命和甲苯噻嗪的剂量分别为120mg/kg体重和6mg/kg体重，即每克体重注射1.5ul。

3）麻醉剂一般在注射后2-3分钟起作用，如有必要，可再注射一次，用量为每克体重注射0.7ul。

注意事项

l 注射一次麻醉剂，动物的苏醒时间大约在60-90分钟之间，多次注射则苏醒时间会更长（4小时以上）。

l 多次注射可能会使动物过度麻醉。

3，成像系统使用

（1）系统启动：打开电脑主机和监视器；打开IVIS成像系统；当电脑显示桌面后，打开活体成像软件；按照提示输入用户ID（最多三个字面），然后点击“Done”；点击镜头控制面板的“Initialize”按钮初始化系统；等待系统进行初始化，可以听到马达运转的声音和看到系统状态显示发生变化；等待镜头达到它的工作温度，（参看“工作温度”）直到镜头控制面板上绿灯亮；此时镜头温度被锁定在工作温度-105℃，可以进行操作了。

（2）在成像暗箱门下方是平台加热控制按钮，停止按钮，手动光照控制按钮和镜头状态指示灯。具体操作如下：

平台温度控制器：改变平台的温度，并且可以显示平台摄氏温度或华氏温度。平台温度预设为37℃，按下“set”按钮可以看到平台的实时温度，持续按住“set”按钮的同时按上下按钮可以改变平台温度，注意：如果改变的幅度过大，平台可能最多需要45分钟的加热时间。

停止按钮：可以立刻停止成像暗箱内部所有四个马达的运转。

注意事项：

只有当发生严重故障时这个按钮才可以被按下，如当平台上升过程中，承载的样品过高可能会损坏成像暗箱时。按下停止按钮后，如需重新启动系统，请按照程序启动系统并进行初始化。切断IVIS系统的电源，等待5秒，重新接通电源，点击镜头控制面板上的初始化按钮，完成初始化程序后就可以进行成像操作了。

光照强度控制旋钮：使用此旋钮可以改变成像暗箱内部LED的光照强度，这个LED是用来照亮样品用的。LED的开关是成像软件的镜头控制面板的“Light On”按钮。通过旋转按钮调整需要的光照强度，旋钮分十阶并有铃声提示，当达到所需的光照级别，取消勾选镜头控制面板的“Light On”可以关掉LED。

状态指示灯：指示是否可以打开成像暗箱门，只有当绿灯亮时才可以打开。一定不要在红灯亮时打开暗箱门。

（3）气体麻醉：IVIS系统包含一个麻醉气体控制装置，在成像暗箱的后面有两个0.25英寸的进气和出气口，暗箱的右边是控制开关，暗箱内也有两个0.25英寸的出气和进气口分别位于样品台的左后和右后方。

注意事项：

请仔细确认暗箱内的管道或其它固定装置不会发出荧光，使用者在进行成像操作前请测试这些管道和装置。

（4）暗箱门的操作：IVIS成像暗箱只需使用很轻的力即可牢固锁住箱门。请定期检查箱门的锁紧系统是否工作正常。连接IVIS成像系统成像暗箱平台的挡帘可以遮盖住平台下部的空间，这个挡帘提醒使用者不要在平台下放任何物品。

（5）成像前基本准备

黑色垫纸：尽管平台是经过黑色电镀处理的，但还是建议使用者在成像时在平台上垫一张高品质的黑色垫纸，特别当是生物样本时。高品质黑色垫纸可以有效的阻止光反射，并且可以保持平台清洁。

将成像物品置中：将样品放置在成像平台正中，关上暗箱门，勾选镜头控制面板上的“Live”按钮，监视器上将显示样品的图像。如果样品已经置中，取消勾选“Live”按钮后就可以进行成像操作了，如果偏离中心，点击“Live”按钮后，打开箱门，调整样品的位置，重复上述步骤直到在监视器上看到样品图像。

发光材料：使用者请牢记“任何物体都会发荧光”，大部分塑料，几乎所有的磁带，植物，染料，吃的食物（大部分是植物），鼠尿，动物窝里的草垫都已经被证实可以发荧光，采用荧光成像时应尽量避免这些物质的污染。使用者操作IVIS成像系统时应戴上手套。

（6）系统关闭程序

不建议在一天内多次开关系统，每天凌晨，通常是早上4点到6点，IVIS系统会自动进行背景测量和系统自检。如果必须关闭系统，一定要严格按照以下步骤进行。

a, 保存实验结果，关闭活体成像软件。

b, 关闭IVIS成像暗箱。

c, 关闭Windows操作系统。