重聚焦显微镜原理和理解

重聚焦显微镜成像原理

基本原理

从一个点光源（laser）发射的探测光通过透镜聚焦到被观测物体上，如果物体恰在焦点上，那么反射光通过原透镜应当汇聚回到光源，这就是所谓的共聚焦，简称共焦。共焦显微镜在反射光的光路上加上了一块二向色镜（dichroic mirror），将已经通过透镜的反射光折向其它方向，在其焦点上有一个带有“针孔”（Pinhole），小孔就位于焦点处。可以想像，探测光焦点前后的反射光通过这一套共焦系统，必不能聚焦到小孔上，会被挡板挡住。于是光度计测量的就是焦点处的反射光强度。其意义是：在任何时候，都只能获得一小部分光点，因此，在显微镜中，任何时候都不会产生完整的图像。通过移动透镜系统，逐点扫描，可以对一个半透明的物体进行三维扫描。

对于一枚硬币，在移动透镜系统的过程中，其焦距是不变的，因此，对于一些非平面的部分，它其实是在焦点外的，因此反射到检测器的光强就很弱。因此光强的强弱表示的是深度信息。

得到的原始数据成为Z堆栈，是1360102431 其中10361024是分辨率。而31是将300um的高度分成31份，即每张13601024图片，都是在焦距移动一个等级时得到的。每个像素点的值其实是强度。

强度和焦点与物体之间的距离有着对应关系：