植物钙波传递机制被揭示！原来是特定氨基酸的扩散和整体流

植物钙波传递机制被揭示！原来是特定氨基酸的扩散和整体流
众所周知，虽然植物缺乏神经系统，但依然可以长距离地快速传输信号，便于组织和器官之间各种信息的传递。因此，植物必须有其独特的机制，以便对远处的逆境等信息做出快速反应。虽然已知钙波（Calcium wave） 是各种远距离逆境信号传递的关键组分，但能充分阐明该现象和机制的模型尚未被建立起来。

近日，来自英国John Innes Centre的Christine Faulkner教授团队研究通过建立高精度的钙波动力学定量分析及多种报告基因检测体系，发现钙波的传递是由氨基酸扩散和整体流（bulk flow）介导完成的，此外还发现单独的钙波并不能起始所有的系统性防御反应。相关研究成果以题为Diffusion and bulk flow of amino acids mediate calcium waves in plants的论文发表在国际知名期刊Science Advances上。

首先，研究人员用携带钙指示蛋白（G-CaMP3）的拟南芥植株比较了不同处理引发的钙波动态，发现损伤（Needle wound）和触摸（Trichome touch）均能触发辐射状的局部钙波并随时间逐渐变慢，且它们在初始速度上有一定的差异；而损伤、谷氨酸（Glutamate, Glu）及盐处理产生的是快速的维管束钙波及较慢的远端钙波，也具有类似的动力学趋势。尽管叶片盐滴处理触发的是系统性钙波，但也是起始于叶脉而不是处理所在的位置（图1）。由此可知，不同刺激引发的局部和远端钙波在动力学上的一致性表明不同触发因子具有共同的钙波动传递机制，而随时间不断减弱的传递速度表明其可能该过程可能是被动的。

图1. 不同刺激引发的局部及远端钙波动态趋于一致

维管束中的钙波具有远高于局部及远端钙波信号的传递速度【1】。研究人员发现了在有水滴及荧光指示剂HPTS的条件下对子叶进行损伤处理比干燥条件下损伤处理诱导的钙波速度要显著更高，而且HPTS与钙波（通过红色钙离子敏感荧光蛋白R-GECO1.2监测）的动态趋于一致，不过钙波传递的速度比HPTS的移动更为迅速（图2）。由于HPTS在维管束中的运输是由整体流（bulk flow）介导的，由此推测维管束中的钙波也是由整体流传递的。更高速的钙波传递表明：除整体流外，流动路径附近细胞中离子通道的激活应该也是维管束中钙波传递所必需的【2】。

图2. 损伤触发的维管束钙波动态与整体流（bulk folw）一致

钙波的主动传递是由什么机制介导的？通过对已知盐诱导钙波依赖的Ca/ROS离子通道关键组分TPC1（vacuolar channel TWO-PORE CHANNEL 1）、RBOHD/ RBOHF（细胞膜NADPH氧化酶）对应突变体中的钙波动态进行分析，发现损伤诱导的钙波传递与TPC1/RBOHD介导的Ca/ROS双波路径无关，后续研究也表明与胞间连丝无关。

前人研究表明谷氨酸受体样细胞膜蛋白GLR3.3, GLR3.6是先天免疫应答中介导钙离子内流的阳离子通道。它们可以将创伤诱导的叶片内谷氨酸积累转化为电信号和钙振荡，并将胁迫信号传递给远处叶片，以增强茉莉酸（JA）下游响应基因的表达【3-5】。突变体分析发现glr3.3突变体中的局部钙波传递被阻断（图3A, B）。单细胞转录组结果表明GLR3.3除在维管束韧皮部中表达外，还在叶肉细胞和叶表皮细胞中表达，表明其可能在细胞之间的钙波传递中起作用。进一步分析表明GLRs的激动剂，比如谷氨酸（Glu）、甘氨酸（Gly），能出发钙波的局部运输（图3C, D）。这些结果钙波的主动传递依赖于GLR3.3，而Glu、Gly等GLRs的激动剂可能是诱导细胞钙响应的移动信使。

图3. 损伤引发的局部钙波依赖于GLR3.3，外源的GLRs激动剂（氨基酸）可诱导钙波局部传递

研究人员利用表达谷氨酸指示蛋白iGluSnFR (intensity-based glutamate-sensing fluorescent reporter)的拟南芥Glu的局部及长距离动态变化均与植株在损伤及触摸引发的钙波传递几乎一致，R-GECO1.2/iGluSnFR双指示系统也表明了Ca与Glu的局部及长距离动态变化均一致（图4）。这些结果说明Glu是在伤口处产生并经扩散成为移动的信号分子，从而介导损伤及触摸引发的钙波传递。然而，报告基因、分析表明标记基因的比较表达分析表明单独的Glu或Gly不能诱导类似于损伤触发的局部JA反应。

图4. 离质体中的谷氨酸波动与损伤及触摸引发的钙波动态一致

综上所述，该研究发现植物中钙波的传递是由特定氨基酸的扩散和整体流运输路径共同介导完成的。具体而言，细胞与细胞之间的信号传递依赖于扩散至离质体中的Glu、Gly等氨基酸对细胞膜上GLRs的激活，导致胞内钙离子浓度的上升；在有损伤的条件下，伤口处的大量氨基酸会通过木质部快速运输到远端，继而从木质部卸载并扩散至离质体中，GLRs被氨基酸激活引起钙离子浓度的波动，完成信号的远距离传递（图5）。

图5. 损伤诱导局部及系统性钙波传递模型