nature|植物不同胁迫反应的非侵入性光遗传刺激

这个问题
无根植物无法逃脱危险。相反，当它们感知到压力源时，比如物理伤害、病原体或盐，它们会迅速产生化学和电子信号，这些信号被认为会触发代谢开关和基因重编程。植物对胁迫的第一个反应是电信号或细胞内液体(细胞质[Ca2+])中钙离子浓度的变化，或激素或活性氧(ROS)的变化。这些信号建立了一个复杂的调节网络，使植物能够应对各种压力。然而，人们对这些信号如何产生明确的生理结果知之甚少。一些解码钙离子和电信号的分子机制已经通过基因手段揭示了功能丧失突变体的研究。但要解码离子信号，需要非侵入性工具。

观察
光遗传学是一项强大的技术，它利用光以精确的时空分辨率操纵细胞。我们之前介绍了一种用于植物的光遗传技术5，该技术使靶细胞表达光敏离子通道(通道视紫红质)。我们开发了一种通道视紫红质变体XXM 2.0，它对钙离子具有高度渗透性(图1)，并使用它来增加烟草植物Nicotiana tabacum的细胞质[Ca2+]，使用绿光作为触发器。

图1 |用绿光刺激基因工程的XXM 2.0和ACR1 2.0通道视紫红质会触发烟草植株叶片对生理胁迫的不同反应。烟草植物产生视网膜(Ret)，一种视紫红质的发色团(一种吸收光以启动蛋白质功能的化学物质);eYFP是增强黄色荧光蛋白。a，正常叶片(顶部)和转基因叶片(显示萎蔫和斑点)的表型;中间和底部)24小时后(n = 6片叶子)。比例尺，5厘米。b，同时定量正常和转基因叶片的膜电位(Vm，上)和过氧化氢(H2O2，下)动态。数据为平均值±标准误差(阴影);Ret-XXM 2.0 n = 7片，Ret-ACR1 2.0 n = 8片，Ret-eYFP n = 10片。粗绿色条表示绿色照明的时间段。来源:Ding, M. et al./Nature (CC BY 4.0)

在本研究中，我们将xxm2.0与另一种通道视紫红质ACR1 2.05结合使用。当绿光照射在ACR1 2.0上时，它通过引起阴离子外溢触发膜去极化，导致钾离子释放。XXM 2.0通过钙离子进入细胞触发类似的电信号。这使我们能够比较烟草植株中膜去极化单独或膜去极化加胞质[Ca2+]增加所引发的生理反应。

我们使用全光学生理测量(图1)来修改和监测由两个通道视紫红质触发的电，ROS和细胞质[Ca2+]信号。表型(如叶片萎蔫或“死斑”)、代谢物谱(如植物激素)和转录组分析(以呈现基因表达水平)的比较被用来确定生理反应。

依赖于XXM 2.0的胞质[Ca2+]信号伴随着可重复的膜去极化，这可以通过光强和持续时间来调节。在XXM 2.0刺激后，细胞质[Ca2+]和电信号随后释放过氧化氢(ROS)。相比之下，ACR1 2.0刺激引发了类似的膜去极化，但没有释放明显的ROS。这些结果表明ROS的产生依赖于细胞质[Ca2+]。

值得注意的是，尽管触发了相似的膜去极化，但两种通道紫红质产生了不同的生理反应，这表明了它们的表型、代谢物和转录重编程。ACR1 2.0诱导的阴离子外溢依赖的去极化引发了渗透胁迫反应和渗透胁迫相关基因的上调。相比之下，由XXM 2.0产生的胞质[Ca2+]增加刺激了免疫反应和生物应激相关基因的上调。

未来的发展方向
光遗传学工具可用于实现植物胁迫响应的精确时空控制，如钙离子信号、电信号或特定离子通量。因此，特定离子通量在植物生长、发育和胁迫反应中的确切作用可能会被解开。从这些研究中获得的见解可以使基因性状的调整提高作物的抗灾能力。

使用这种技术的未来研究可能有助于回答植物生物学中一些长期存在的问题。例如，它们可以揭示局部和传播信号如何为系统通信编码信息，以控制植物的压力管理。他们可以展示压力记忆是如何受到特定化学和电子特征的影响的。然而，植物光遗传学工具包需要大大扩展。例如，更多的视紫红质可以使植物科学家研究植物营养和生理中离子运输和信号传导的关键方面。空间光遗传控制将成为研究植物在特定组织甚至亚细胞水平上的反应的有用工具。——丁美琪和高世强来自德国<s:1>日尔斯堡大学。