秀丽线虫基础实验-- Egg Prep（卵制备）

哈喽今天记录的是egg prep的实验过程

目的：从成年秀丽隐杆线虫中获得卵（主要是胚胎期的卵）。

方法：使用漂白液（NaOCl 和 NaOH）消化成年虫体，只留下耐漂白的卵。

步骤概述：

1. 收集线虫：取有C，elegans的NGM，使用m9 buffer（或无菌PBS)冲洗，并收集到离心管中，在2ml tube里面，沉淀后把上面的m9扔掉，留到0.75

2. 漂白处理（bleaching）：

        ①.配置漂白溶液（bleach solution）：（一般 bleach7.5，NAOH2.5）

ex:bleach 900um,naoh 400mg，加入后搅拌（4~5）

搅拌时用vortex mixer搅拌器。（30秒~2分钟观察一次）

*观察时，如果有很多虫子，需继续搅拌；但是如果搅拌了很多次还是有虫子的时候，可加入bleach*===一般卵太多了，不好处理，一般都是到0.5，bleach和naoh的比例500：200

用显微镜观察到很多卵时就可以。

3.卵孵育和消化成虫

室温或37°处理5~10分钟，期间每30秒观察一次成虫溶解情况。当成虫完全裂解时*液体将会变得更透明，只剩下卵。（一般处理的时间不能太久，3分左右就可以）

4.离心清洗

离心1~2分（一般是40秒，使用时开口朝外）使卵沉淀在管底，扔掉上面的清液，用m9 buffer每一次使用1ml 清洗（4~7次）去除漂白剂残留。

最后一次洗完后，把m9 buffer全部扔掉，留下最后一点倒入NGM内，并加入7ml m9 buffer。写入日期放入dry oven内。