一个兔单克隆中和抗体的诞生

兔源抗体以其高亲和力和多样性而熟知，这使其成为检测分析中研究试剂的有用来源。过去，兔单克隆抗体是使用杂交瘤技术生产；然而，目前是由更强大的单B细胞培养和分子克隆方法驱动。

（单B细胞兔单抗开发流程）

对于单B细胞抗体开发的理解，我们以一个客户开发项目为案例来给大家展示参考看看：基于单B细胞抗体开发平台，研发一个阻断型中和兔单抗的过程（由于隐私原因，靶标A相关详细信息不作披露）。

第一阶段：抗原制备

该项目抗原靶标A为分泌型胞外蛋白，有明确的受体蛋白B，考虑后期对于重组蛋白A的活性质控测试，以及后续中和抗体的阻断检测筛选需要，所以选择真核哺乳细胞重组表达系统，同时分别表达靶标A蛋白和其受体蛋白B，并基于Elisa进行互作检测验证。

（靶标A及受体B蛋白SDS-PAGE&Elisa互作检测数据）

第二阶段：免疫及阳性B细胞筛选

通过第一阶段获得的靶标A抗原重组蛋白对兔子进行免疫，包括免疫途径、佐剂和加强免疫策略。在第三、四次免疫后，将对兔血清进行分析（血清将基于抗原ELISA检测进行评估），以确定应答动物。由确定的阳性应答兔子提供PBMC和脾脏来进行B细胞的差异化筛选富集和培养，然后对培养上清进行Elisa检测验证，确定阳性B细胞克隆，再进行竞争性Elisa检测筛选中和抗体克隆。

（靶标A阳性B细胞Elisa检测及中和抗体竞争Elisa筛选部分数据）

第三阶段：阳性单B细胞抗体序列及结构分析

针对二阶段单B细胞培养上清检测结果，挑选25个优选中和抗体克隆完成抗体基因序列扩增，同时测序进行分析。

（靶标A的25个阳性抗体可变区序列框架）

基于获取的抗体可变区序列信息，构建抗体结构模型，并预测抗体和靶标A的结合模型，基于靶标A和其受体B的互作模型，并综合阶段3的检测数据，选择合适克隆。

（左：靶标A与其受体B互作模型；右：阳性克隆抗体与靶标A的结合模型）

第四阶段：抗体重组表达、鉴定

从25个优选中和抗体克隆中挑选1个克隆进行重组表达，及二次中和检测验证。

（靶标A的中和抗体重组表达检测验证）

至此，一个针对靶标A的中和型重组兔单抗便完成开发及交付。

武汉迈思生物研发团队拥有十多年重组蛋白和重组抗体研发经验，聚焦于真核哺乳细胞重组蛋白表达和单B细胞重组兔单抗开发，提供更简单、更高效的重组蛋白和重组抗体开发服务。

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关于我们

武汉迈思生物科技有限公司立足于解决行业内功能活性蛋白及高质量、高通量抗体开发难的痛点，依托自建的两大核心平台：哺乳细胞蛋白表达平台和B细胞抗体开发平台，竭诚为广大科学研究机构和诊断、医药企业客户提供一站式抗体开发服务。公司业务涉及功能活性蛋白重组表达，科研应用、诊断应用、药用抗体早期发现的重组兔单克隆抗体开发，重组抗体表达，稳定细胞株构建等服务。