TPP揭示前列腺癌细胞焦亡的细胞靶点

焦亡是一种以细胞破裂和促炎因子释放为特征的程序性细胞死亡形式，其具有强大的免疫原性，能够有效激活免疫反应并引发肿瘤免疫疗法。焦亡在肝癌和胃癌的预防和治疗中的临床价值已得到证实，其通过参与癌症的侵袭、增殖和迁移，从而影响癌症预后，并且相关研究表明焦亡也在前列腺癌的发展中发挥作用，但是具体机制并不清楚。

黄连素酸（GBA）是从藤黄属植物的干树脂中提取的一种笼状黄酮成分，先前的研究表明GBA能够抑制多种癌症的肿瘤形成和转移，但其作用细胞靶点尚不清楚。近日，一篇发表在Journal of Medicinal Chemistry上的一篇名为Thermal Proteome Profiling Strategy Identifies CNPY3 as a Cellular Target of Gambogic Acid for Inducing Prostate Cancer Pyroptosis的文章通过热蛋白组学分析（TPP）方法在全蛋白质组水平上识别细胞靶点，成功确定了GBA的特异性靶点，证实了GBA能够诱导前列腺癌细胞的焦亡。

接下来，本文将着重介绍 TPP 在此项研究中的具体应用以及所发挥的作用，期待能够为相关研究带来一些启发。

该研究首先通过GBA处理了四种不同的癌细胞，再通过TPP技术结合稳定同位素标记（SILAC）进行靶点鉴定。根据先前的研究，在TPP实验中使用的配体浓度通常低于药物处理所用的浓度。为了避免药物处理引起的细胞整体蛋白质水平的变化，故在研究中采用了最低有效浓度的一半（1 μM）进行TPP实验。研究结果显示一共鉴定了1038种蛋白质，其中只有24种表现出高置信度，特别是一种名为CNPY3的蛋白质，其表现出显著更高的整体热稳定性。

为了验证GBA与CNPY3的结合，研究首先通过表面等离子共振（SPR）分析测定了它们的结合亲和力，确定了结合常数（KD）为278 nM，表明GBA与CNPY3之间存在强相互作用。同时进行了细胞热位移试验（CETSA）以评估CNPY 3在GBA处理后的热稳定性，结果显示GBA提高了CNPY 3在52 - 58°C温度范围内的热稳定性。为了深入了解GBA与CNPY3的结合位点，研究采用药物亲和力响应靶标稳定性（DARTS）技术结合LC-MS/MS分析来研究GBA与CNPY3结合的肽段，结果表明在CNPY3的四个已鉴定肽段集中在与溶酶体脂解相关的脂肪酶b型结构域。

GBA分子探针的合成图

CNPY3已鉴定为GBA的直接细胞靶点

本文通过TPP、SPR及DARTS等技术，揭示了黄连素酸（GBA）通过靶向CNPY3诱导前列腺癌细胞焦亡的机制。研究的优势在于结合多种先进技术，不仅确定了CNPY3为GBA的关键靶点，还阐明了其通过去乳酸化影响溶酶体稳定性的分子机制。然而，研究的局限性在于缺乏对CNPY3在不同癌症类型中的普遍作用验证，且未深入探讨GBA在体内模型中的长期疗效和潜在副作用。总体而言，该研究为前列腺癌治疗提供了新的分子靶点和治疗策略，同时也展示了TPP、SPR及DARTS技术联用在发现天然产物独特药用模式中的应用潜力。

GBA诱导DU145细胞焦下垂的机制的示意图

文献：Zhang XW, Li L, Liao M, et al. Thermal Proteome Profiling Strategy Identifies CNPY3 as a Cellular Target of Gambogic Acid for Inducing Prostate Cancer Pyroptosis. J Med Chem. 2024;67(12):10005-10011. doi:10.1021/acs.jmedchem.4c00140