博奥龙/biodragon| IHC高灵敏度Polymer二抗

货号	名称	规格
BDAA0165	Polymer HRP Goat Anti Mouse IgG(H+L),Ready to Use	3ml/10ml/100ml
BDAA0166	Polymer HRP Goat Anti Rabbit IgG(H+L),Ready to Use	3ml/10ml/100ml
BDAA0167	Polymer HRP Goat Anti Mouse/Rabbit IgG(H+L),Ready to Use	3ml/10ml/100ml

免疫组化（IHC）是利用抗体抗原相互结合的原理，使用带荧光的抗体检测组织切片中的蛋白质或是对抗原进行定位，通过有色酶底物显色检测或荧光染料荧光检测进行观察。

无论使用何种具体方法，该技术的第一步是一抗与其特异性靶标的选择性结合。然后，这种相互作用可以直接或间接地通过不同标记可视化，IHC二抗根据标记方法的不同可以分为以下五类：

间接法，二抗选择的是常规的酶标抗体，常用的标记酶是HRP，如【HRP-山羊抗兔IgG(H+L) #BF03008】

Figure 1. Indirect immunostaining method.

这类二抗的价格较为低廉，且为实验室常备基础试剂，较容易获取。

但是对于低丰度的蛋白，灵敏度低，结合效果较差。

PAP法，又称为过氧化物酶-抗过氧化物酶法。在孵育了二抗后，利用IgG的二价特性，再孵育一种能结合HRP的第三层报告抗体（PAP复合物（过氧化物酶--抗过氧化物酶抗体复合物））。

Figure 2. Two- (a) and three-step (b) bridge immunostaining methods.

PAP法相比于间接法，因为每个抗原位点定位了几个酶分子，因此提高了灵敏度，据报道，PAP法的灵敏度比两步间接法高出近100至1000倍。

但同时该方法也存在也提高了步骤繁琐、特异性抗体与PAP复合物的抗酶抗体必须为同源动物（同一种属动物）、多层检测抗体可能会增加与组织抗原非特异性相互作用的风险。

ABC（SABC）法，又称为亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法。采用此方法的二抗上会标记生物素，加入的由亲和素以及标记了HRP的生物素组成ABC复合物与二抗结合，来进行信号的放大。

Figure 3.Avidin/streptavidin immunostaining method.

这种方法的优点是由于亲和素四聚体可以结合四种生物素复合物，可形成含有几种报告酶的更大的ABC复合物，导致抗原位点的信号强烈放大，从而能够成倍提高灵敏度。

但是，除了同样含有实验流程较长的缺点外，还需考虑，大的ABC结构可能难以在组织中有效扩散，内源性生物素的存在是背景的主要来源，因此需要内源生物素的封闭。此外，凭借其高等电点（pI=10），亲和素带正电，可以结合带负电的分子（例如核酸），它的碳水化合物部分可以与其他分子如凝集素相互作用，但这个问题可以通过下面的LSAB方法进行克服。

LSAB（SP）法，又称为生物素与链霉亲和素法。这种方法的主要区别在于它使用链霉亲和素而不是亲和素，使用HRP标记的链霉亲和素，与生物素化的二抗结合。

Figure 4. LAB/LSAB (a) and BRAB (b) immunostaining methods.

与亲和素相比，链霉亲和素没有会产生非特异性吸附的糖基，从而消除了与凝集素样分子的非特异性相互作用，并且它具有中性pI，从而降低了静电结合的风险。因此，LSAB方法减少了部分背景染色问题，其灵敏度据报道是ABC方法的十倍。

但与ABC法类似，LSAB方法在实验过程中同样需要进行内源生物素封闭，流程较为繁琐。

博奥龙Biodragon Polymer IHC 二抗，即克服了以上问题，同时又能满足高灵敏度的需求

Polymer法，不同于使用生物素-亲和素放大型号的方法，通过二抗-聚合物-酶的复合物与一抗结合，达到荧光定位的效果。

Figure 5. Polymer-based immunostaining method

基于聚合物共价连接的方式，利用与抗体和酶相连的聚合物链，大大增加了酶的数量，从而增加了组织上特定抗原附近的荧光强度。二抗上的聚合物都是性质较为稳定的物质，如葡聚糖，纤维素等，在天然条件下不易降解，酸碱耐受范围较广。

早期的Polymer抗体使用过程中，一些用户进行IHC实验时偶尔会出现检测灵敏度低的情况，这种情况可归因于大分子聚合物分子间的空间位阻，空间位阻阻碍了抗体与组织之间的结合效果。为了解决这个空间障碍的问题，已经开发了紧凑的聚合物复合体来减少空间位阻，使组织更容易被酶标物渗透。

此外，由于聚合物系统不需要生物素，亲和素的使用，因此避免了由内源性生物素表达引起的非特异性背景染色，相比ABC法和LSAB法，实验流程和周期也简单化了，缩短了。

	间接法	PAP法	ABC法	LSAB法	Polymer法
优点	操作简单，价格低	灵敏度较高无需偶联	灵敏度高	灵敏度高	灵敏度高，操作简单
缺点	灵敏度低	操作繁琐非特异性结合风险	操作繁琐非特异性结合风险	操作繁琐 非特异性结合风险	价格相对较高