流式细胞仪培训-零散day2

最新推荐文章于 2020-12-12 11:11:34 发布

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文章标签：流式

本文链接：https://blog.csdn.net/emmal_/article/details/100050101

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本文详细介绍了流式细胞仪的应用，包括检测对象、上样方式和电信号放大部分。讨论了敏感度、微粒直径、荧光素选择、电压设定及补偿原则。此外，还涉及珍贵样本处理、试剂如LEGEND plex的工作原理和微球材料选择。流式分选技术如磁珠分选的优势和术语如MFI也被提及。

摘要由CSDN通过智能技术生成

检测对象：细胞，染色体，微生物，人工合成微球。
上样包括正压上样与负压上样，负压上样与LC-MS的上样阀一致，也称蠕动泵。
电信号放大部分：PMT为光电倍增管（常用，普通），APD为雪崩二极管，长波长时（＞600nm），激发效率依旧强和稳定。
灵敏度：20MESF，MESF Molecules of Equivalent Soluble Fluorochrome各个峰的等量可溶性荧光分子，指流式细胞仪能够检测到的最小荧光分子数。
检测到的微粒直径：0.05~1um。
选择荧光素原则：避免选择同时使用荧光素及其耦合荧光素，因为荧光共振原理只能检测到其中一种荧光。
电压：电压过低，阴性峰与阳性峰无法分开；电压过高，加大背景噪音。
补偿：原则为，以阴性在图中位置为基准，横平竖直。
同型对照：由于存在Fc段非特异性结合（如化学键，生物键和分子之间吸引力造成的结合，使得抗体与细胞表面的Fc受体结合），如小鼠抗人，则抗体的种属来源自小鼠。
珍贵样本：可使用“刺激+阻断”的操作保证细胞分子分泌量：刺激细胞因子分泌后要用阻断剂阻断细胞外分析（阻断后保证细胞内因子含量水平，否则细胞因子均分泌到细胞外，无法检测），同时在阻断的时候注意阻断剂有毒性，应减少接触。

试剂：
11. LEGEND plex：通过流式检测蛋白含量（ELASA也是

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