- 检测对象:细胞,染色体,微生物,人工合成微球。
- 上样包括正压上样与负压上样,负压上样与LC-MS的上样阀一致,也称蠕动泵。
- 电信号放大部分:PMT为光电倍增管(常用,普通),APD为雪崩二极管,长波长时(>600nm),激发效率依旧强和稳定。
- 灵敏度:20MESF,MESF Molecules of Equivalent Soluble Fluorochrome各个峰的等量可溶性荧光分子,指流式细胞仪能够检测到的最小荧光分子数。
- 检测到的微粒直径:0.05~1um。
- 选择荧光素原则:避免选择同时使用荧光素及其耦合荧光素,因为荧光共振原理只能检测到其中一种荧光。
- 电压:电压过低,阴性峰与阳性峰无法分开;电压过高,加大背景噪音。
- 补偿:原则为,以阴性在图中位置为基准,横平竖直。
- 同型对照:由于存在Fc段非特异性结合(如化学键,生物键和分子之间吸引力造成的结合,使得抗体与细胞表面的Fc受体结合),如小鼠抗人,则抗体的种属来源自小鼠。
- 珍贵样本:可使用“刺激+阻断”的操作保证细胞分子分泌量:刺激细胞因子分泌后要用阻断剂阻断细胞外分析(阻断后保证细胞内因子含量水平,否则细胞因子均分泌到细胞外,无法检测),同时在阻断的时候注意阻断剂有毒性,应减少接触。
试剂:
11. LEGEND plex:通过流式检测蛋白含量(ELASA也是