如何跑出漂亮的大分子western-blot图

    Western Blot操作步骤多，每个细节的差错都会造成图片不理想，那么怎么跑出漂亮的Western Blot图片？如果你的蛋白分子量大于150KD，但苦于一直跑不出好看的western-blot，那么这篇文章，你一定得看。关注这五个步骤细节，教你跑出漂亮的大分子western-blot图，童鞋们赶紧来围观吧！

 

 

选对凝胶很重要

    3种最常见的凝胶包括Tris-Glycine, Bis-Tris and Tris-Acetate. Tris-Glycine凝胶的PH为8.6，且保质期很短。在跑胶的过程中，PH还有上升的趋势，可达到9.5。这会导致蛋白降解和低分辨率。

    Bis-Tris凝胶的PH为6.4，相对Tris-Glycine凝胶，稳定性和保质期都有所增加。但这种凝胶需要在溶液中增加抗氧化剂，比如DTT，以维持蛋白的还原性。

    Tris-Acetate 凝胶的PH为7，跑大分子蛋白会呈现很高的分辨率。跑大分子蛋白时，我们推荐使用Tris-Acetate 凝胶。

 

凝胶浓度很重要

    既然选择了Tris-Acetate 凝胶，还有几个要考虑的问题。凝胶浓度与孔径成反比：浓度越小，孔越大。较大的蛋白质更容易通过较大的孔，所以我建议使用低百分比的凝胶，如7％。可以使用梯度凝胶或非梯度凝胶，梯度凝胶非常适合新样本。

 

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