原核表达常见问题解答

    pET系统是目前应用最为广泛的原核表达系统，已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白。经过与使用过和正在使用这个系统的科学家的交流，我们发现了一些在使用pET系统的过程中以及原核表达中的一些常见问题。在此，我们选取了其中一些比较有代表性的问题，附上我们的建议改进方案，并期待和你一起分享成功的喜悦。

原核表达研究者关心的10个问题：

1.目的蛋白总是以不可溶的形式出现真是令人烦恼

    在大肠杆菌中表达的异源蛋白经常发生错误的折叠，并聚集成为包涵体。经过诱导，目的蛋白通常可达细胞总蛋白的50%以上。虽然有一定比例的蛋白以可溶的单体形式存在，而多达95%（甚至更多）的蛋白则在包涵体中。实践中，有很多实验室采取降低诱导温度，例如 25–30°C (Burton et al. (1991)Prot.Exp. Purif.2, 432-441)，或降低IPTG浓度(0.01–0.1mM)并延长诱导 时间，还 有采用特别的培养基 (Blackwell and Horgan (1991) FEBS Lett. 295, 10-12)等方法获得更多的可溶蛋白。随着越来越多的蛋白折叠途径被阐明，相信会出现更多有效的增加可溶性目的蛋白的实验方法。然而，让目的蛋白以包涵体形式聚集也并非总是坏事。不溶态在某些情况下非常有利：

a. 形成包涵体是目的蛋白表达量很高的表现。

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