做成像的你不得不了解的真相
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大熊背
这个作者很懒,什么都没留下…
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相机制冷温度越低越好么?——做成像的你不得不了解的真相9
两种相机使用同样的背照式芯片,因此量子效率和像元尺寸相同,所以收集到的信号相同,散粒噪声也相同。目前市面上常见的CCD和sCMOS相机多为制冷相机,具体的制冷温度在各个生产厂家和相机型号之间各有不同。接下来我们将会开启一个新的系列,继续为大家介绍相机应用知识,什么,想知道系列名称?尽管两种相机制冷温度相差20℃,但由于暗电流本身非常小,无论是在强光还是弱光条件下,对于信噪比的贡献都非常微弱,可以忽略不计。即使是在长达1s的曝光时间下,两者暗电流的差别也只有0.1e-,信噪比差别仅为0.01。转载 2024-08-05 18:58:24 · 2 阅读 · 0 评论 -
如影随形的噪声(下)——做成像的你不得不了解的真相8
Photometrics 在噪声控制方面一直是业内的佼佼者, Prime 95B和Prime BSI都内置了最先进的denoising技术,它采用先进的内嵌图像算法,对单帧图像实时处理,在降低图像噪声的同时,不影响信号强度,保证了图像的可定量性。对比下图中使用denoising功能前后的图像,我们可以很明显的看到信噪比的提高,下方的线强度曲线(line profile)也充分展现了denoising功能优异的降噪效果。本期小编就想和大家探讨一下,常用的提升信噪比方法的技术原理,并对他们的效果做定量分析。转载 2024-08-05 18:56:32 · 5 阅读 · 0 评论 -
如影随形的噪声(中)——做成像的你不得不了解的真相8
为了更形象的进行说明,我们拍摄了150张bias图片,找出其中典型的高噪声像素和低噪声像素灰度值的分布情况(图2)。可见,像素的灰度值会随机地在平均值上下变化,低噪声像素的变化区间很小,而高噪声像素的变化区间较大,标准差更大,也就是说噪声更高。椒盐排条虽然好吃,撒了椒盐的图像可不好看,试想一下我们拍了一张图片,却发现上面布满了雪花点,是不是累觉不爱。而CMOS每个像素都有独立的放大器,每列共用一个读出口,因此,每个像素的读出噪声不同,总体遵循。位于偏态分布尾部的那些像素具有相对更大的读出噪声,称为。转载 2024-08-05 18:54:35 · 2 阅读 · 0 评论 -
做成像的你不能不了解的真相8-如影随形的噪声(上)
如果读出噪声的中位数为1e-,也就是说一半的像素的读出噪声少于1e-,另一半多于1e-。然而,由于CMOS相机的读出噪声不再遵循高斯分布,而是呈倾斜分布,其RMS和Median噪声不相等,有一些像素的读出噪声非常高,比如达到3e-。尤其是在弱光高速成像中,其他噪声的影响很小,读出噪声定义了相机的探测下限。这里要告诉大家的坏消息是:散粒噪声的存在是一种物理现象,是不能通过相机的设计来减少的,但它却是信噪比中重要的影响因素。实际生活中的噪声多种多样,比如声音的噪声、电信号传输的噪声以及相机的噪声等等。转载 2024-08-05 19:05:39 · 0 阅读 · 0 评论 -
两分钟测算相机增益(Gain) - 做成像的你不能不了解的真相7
的前提是,图像区域内没有任何样品结构造成的亮度变化,否则标准差还包含这个结构信息。为此,我们可以连续拍摄两张同样场景的图像,然后把两张图像相减。然而,杯具的现实是,方法很简单,在相机完全无信号的情况下,(如显微镜设为全部光都到目镜,或者盖上镜头盖),将曝光时间设为0, 拍摄一帧图像。我们还可以设置不同的曝光时间,重复上述步骤,用多次测量所得的值作图,通过拟合曲线来观察增益的线性度。的设置,图像亮度会变化,但实际探测到的电子数不变,因此信噪比变化不大;的人都找不到相机的出厂报告,也就是说并不知道自己相机的。转载 2024-08-05 18:52:04 · 4 阅读 · 0 评论 -
分辨率(2)- 做成像的你不能不了解的真相6
这时候通常的做法是,加入1.5x额外的光学放大(也可以理解为使用1.5x C-mount),这样16μm像元就等价于1x C-mount时11μm的像元了。把上面的计算应用到其他物镜,可以得到常用物镜与最佳匹配像元尺寸对比表(如下),作为我们的第三个结论:通常情况下,低倍率物镜要求高分辨率相机(小像元)与之匹配。对有些超高分辨率应用,需要对图像做后续deconvolution处理,有时需要做3x或4x的数字采样,此时匹配的分辨率需要在图4表格的基础上做相应比例的缩小。),继续讨论科研相机的分辨率。转载 2024-08-05 18:49:20 · 4 阅读 · 0 评论 -
分辨率(1)— 做成像的你不能不了解的真相6
在选择相机的时候,如果是极弱光和高速的应用,需要追求极限灵敏度,那么选择像元尽量大的相机,譬如Photometrics Prime 95B sCMOS像元11 μm;如果追求分辨率,那要选择像元尽量小的相机,譬如Photometrics Iris15,1500万像素,像元小至4.25 μm。但在讨论科研相机的分辨率和成像质量时,单看像素个数是不全面的,应该使用更科学的标准来判断。事实上,当像素个数增加时,单个像元的尺寸变小,这才是分辨率提高的真正原因。如下图所示,发生衍射后所成的像,比实际的样品大。转载 2024-08-05 18:48:02 · 2 阅读 · 0 评论 -
图像信噪比计算-做成像的你不能不了解的真相5
测量信噪比,需要在同样条件下拍摄多张图像,然后对感兴趣的像素在这一系列图像中的亮度做统计分析: 这些亮度的平均值为信号,标准方差为噪声。我们把显微镜的光设置为全部到目镜,或者盖上相机的镜头盖,用很短的曝光时间(比如1ms),这张图像中仅含偏置offset和读出噪声 read noise,没有信号,称为Bias图像。如果要分析的对象,均匀的ROI或较长的Line都比较难定义,如下面图像上亮的块状或点状区域,这时可以先测量小的ROI的平均亮度,换算为电子数,再通过理论信噪比公式来计算。转载 2024-08-05 18:44:19 · 3 阅读 · 0 评论 -
灰度值与电子数-做成像的你不能不了解的真相4
简单的说,偏置指每个像素强度的初始值,也就是“相机的底”。通常来说,偏置是一个固定的值譬如100,是相机公司在制造相机的时候人为设置的。如果相机的底是0,向下波动的噪声会产生负值,而相机中不能有负值,于是一部分数据被Cut掉了,影响了数据的真实性,设置一个初始值便能很好的解决这个问题。“假设图像中某个像素的灰度值(ADU)为400,已知该图像拍摄时使用的增益(Gain)为0.5 e-/ADU,相机的偏置offset经测为100 ADU,请问这个像素中收集到了多少个电子?电子是实际的物理量,而ADU并不是。转载 2024-08-05 18:42:19 · 1 阅读 · 0 评论 -
做成像的你不能不了解的真相3- 信噪比2
这个,小编也准备了,要下下回分解。第二,如果逐步减少信号强度,蓝色曲线更早的开始偏离理想相机的平行线,而黄色曲线在信号即便很弱的情况下也与理想相机更相似,原因在于量子效率95%的这台相机同时其读出噪声更小(1.5e-)。两位同学来帮忙了,左边是同学A拍到的图像后强度的分析,右边是同学B,柱状图是两种细胞的平均强度,红线代表了标准偏差(噪声)。第一逐步提升信号强度,两条曲线都在向理想相机的平行线靠拢,但永远无法达到理想相机的水品,原因就是量子效率无法达到100%,但高量子效率的相机更趋近于理想相机。转载 2024-08-05 18:38:42 · 6 阅读 · 0 评论 -
做成像的你不能不了解的真相3 - 信噪比1
数字成像设备,需要将光信号转换为可以测量的电信号,例如共聚焦显微镜里的光电倍增管(PMT),或是宽场荧光成像使用的相机(CCD,CMOS相机)。不过,实际拍照时,由于各种原因,例如避免光漂白、光毒性,或是为了提高速度,活细胞成像的信号常常处在相对较低的水平,这时候我们就需要借助信噪比来判断图像质量好坏与否了。除了判断图像质量,对于很多需要做荧光定量测量的应用,例如简单的钙离子成像,FRET/FRAP,或是复杂如单分子定位的超高分辨率成像(STORM/PALM),这也是一个非常重要的概念。转载 2024-08-05 18:36:40 · 2 阅读 · 0 评论 -
做成像的你不得不了解的真相2-灵敏度和QE
根据已知的相机增益(Gain)和偏置(Bias), 用以下公式,换算为真实的强度值(电子数)。背照式芯片将前面提到芯片反过来,半导体信号检测区直接面对信号来源,信号不用穿过上述的金属结构层,上述对信号的阻挡也就不存在了。芯片厂商提供的比如82%的QE,在实际应用时是否能实现是有疑问的。由于半导体材料对光信号的吸收效率和波长相关,我们看到的QE曲线横轴为波长,纵轴为百分比。即实际实验结果,95% QE的背照式CMOS相机,在相同实验条件下,能检测到的信号是82%QE CMOS相机的1.27倍。转载 2024-08-05 18:33:51 · 3 阅读 · 0 评论 -
做成像的你不得不了解的真相1-对比度
为什么说它玄幻呢,因为对比度是除了信噪比以外对图像视觉影像最大的一个参数,但他的词义同时非常广泛,你的电脑屏幕、你拍到的图像、你使用的科研CCD相机都有对比度,但这几个对比度之间或多或少又有些区别。灰度最小值为0,最大值为图像的位深,例如位深为8的图像(即我们常说的8位的图像或者8bit的图像),最大值为2的8次方即256;其中右边的蓝条代表最亮的灰度值,左边的红条代表最暗的灰度值,拉动红条和蓝条实现图像对比度的调节。过程3将图像的灰度值与电脑屏幕的纯白和纯黑对应设置的过程我们称之为图像的对比度调节。转载 2024-08-05 18:30:30 · 3 阅读 · 0 评论