蔡司 co-focal显微镜使用及 Fiji 图像处理

1.开机

开机流程根据仪器的标识，从 1 号开关开始，按顺序开完 7号开关。

注意：6 号仪器的开关有点问题，如果在软件中显示仪器非正常运行，可以尝试把 6 号仪器多开一两次。

2.操作流程

 随后打开软件，先用 locate 模式（人眼）找到组织所在位置

然后使用acquisition模式 （电脑）：

（1）先进行参数的调试（frame size：1024px；pixel time：8；averaging：4x）

（2）把 channels 拖出来，常用的通道有 647、555、488、DAPI（蓝色），可以根据需要调节颜色

（3）在 acquisition-live模式下调整焦距（control+shift粗调，control 细调），找到最亮的视野，然后调整荧光亮度（channels-lasers-百分比），使得下方的直方图最大值在左边线高峰，最小值在右边线 0 刻线位置（每一个荧光亮度都要调节，我们一般用 DAPI 来找焦距和定位）

（4）调整好之后用 snap 拍照，拍好的照片保存到电脑上，命名需要标注好样本名称、各通道对应的蛋白等（可参考其他人命名的形式）。用 U 盘导出图片

 3.Fiji 处理 co-focal 图像

1.将 czi 文件导入 Fiji，导入格式选默认即可

 2.找到 image-color-channels tool 和 image-adjust-brightness/contrast

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        color 是单通道，composite 是多通道。在调节各通道颜色时，用 color 模式（调节时，brightness 和 contrast 都可以调节，使得亮度合适且背景不杂乱）；查看 merge 图像时，用 composite。 

3.调节完成后，file-save as导出图像