中文名:四氢生物蝶呤
CAS:17528-72-2
品牌:MedChemExpress (MCE)
存储条件:Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.
生物活性:四氢生物蝶呤 ((Rac)-Sapropterin) 是芳香族氨基酸羟化酶的辅助因子,也是所有的必需辅助因子 >一氧化氮合酶 (NOS) 异构体。
体外:Mic 高氧条件下的小胶质细胞培养物补充或不补充有效剂量的四氢生物蝶呤 (BH4) (100 μM)。与常氧 (21% O2) 相比,将小胶质细胞暴露于高氧诱导的氧化应激 24 小时后,TSP-1 mRNA 表达和蛋白质显着增加。四氢生物蝶呤补充剂通过减少 Iba-1 和 TSP-1 表达显着防止高氧诱导的小胶质细胞激活,并防止脉络膜外植体中的微血管损伤[1]。
体内:为了评估视网膜中四氢生物蝶呤的水平,从出生后 7、14 和 22 岁的 WT 和 hph-1 小鼠收集了三到五个视网膜池,并通过 LC-MS/MS 进行了评估。 LC-MS/MS 分析证实 hph-1 小鼠视网膜组织中四氢生物蝶呤的浓度水平显着降低约 90%(0.0009±0.0006;p<0.0001、0.01±0.001;p<0.0001 和 2.45±0.40;p <0.005) 与 WT 组(0.014±0.001、0.092±0.01 和 23.13±6.44)相比,分别在 P7、P14 和 P22[1]。
激酶试验:使用并培养小胶质细胞系(SIM-A9)。简而言之,小胶质细胞(每孔 800, 000 个细胞)在 6 孔板中培养,DMEM/F12 (1:1) 补充有 10% 胎牛血清 (FBS)、5% 马血清 (HS) 和 1 %青霉素/链霉素。 24小时后,用不含FBS和HS的DMEM/F12 (1:1)将细胞饥饿6小时。然后,将存在或不存在 100 μM 四氢生物蝶呤的小胶质细胞培养物暴露于模块化培养箱中的高氧(75% 氧气和 25% 氮气)中,并在 37°C 的湿润 CO2 培养箱中维持 24 小时。匹配对照中的小胶质细胞在 37°C、95% 空气和 5% CO2 的培养箱中孵育,并在同一时间点收集。细胞裂解物被快速处理以获取 RNA。条件培养基储存在-80°C,随后用于脉络膜外植体测定[1]。
动物体内实验:从出生后第 7 天到第 9 天,幼鼠与母亲一起暴露在 75% 的氧气环境中,使用氧循环器诱导视网膜血管闭塞 (VO)。将动物麻醉,并使用配备 50 号玻璃毛细管的注射器在 P7 处玻璃体内注射 100 μM 四氢生物蝶呤或载体(无菌 PBS 1×)。在 P9 时,处死小鼠幼崽,解剖视网膜并在 4°C 下用荧光素标记的加纳单叶凝集素 1 (GSL 1)、异凝集素 B4 (1:100) 和 1 mM CaCl2 的 PBS 溶液染色过夜。 VO 的量化是使用计算机软件进行评估的[1]。
参考详情:www.medchemexpress.com/Tetrahydrobiopterin.html
参考文献:
[1]. Rivera JC, et al. Tetrahydrobiopterin (BH4) deficiency is associated with augmented inflammation and microvascular degeneration in the retina. J Neuroinflammation. 2017 Sep 6;14(1):181.