凋亡比例计算 流式_讲堂精粹 | Annexin V凋亡检测实验详解

细胞凋亡(Apoptosis)又称细胞程序性死亡(Programmed cell death)，是一种为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的主动的死亡。凋亡的紊乱与肿瘤、自身免疫性疾病的发生具有直接或间接的关系，在细胞领域具有重要的研究价值。

细胞凋亡是个复杂的过程，不同的凋亡时期具有不同的检测方法。

其中磷脂酰丝氨酸(PS)外翻分析(Annexin V)是检测细胞早期凋亡最常见的方法。原理很简单，即细胞发生凋亡时，位于细胞膜内的PS外翻到细胞膜表面，暴露于细胞外环境中。和偶联荧光染料的Annexin V特异性结合，同时加上核酸染料(它只能穿透死细胞膜)如PI，这样便可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。

接下来，小柏为您讲解下Annexin V检测凋亡的详细实验步骤。

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细胞处理和染色

细胞处理是凋亡实验中很重要的步骤，必须在单细胞悬液的状态下进行后续的染色。

对于贴壁细胞，用不含EDTA的胰酶进行消化(注：对于比较难消化的细胞，也可以用含低浓度EDTA的胰酶消化，最后细胞多洗几遍，减小EDTA鳌合钙离子产生的影响)，收集细胞悬液进行计数；悬浮细胞可直接计数；对于组织样本，需要将其消化成单细胞悬液才可以进行后续实验。具体实验流程如下：

这里要特别提醒一下大家——

贴壁细胞进行消化的时候，消化时间过长会造成细胞膜的损伤，导致Annexin V假阳性；PI具有细胞毒性，染色时间也不易过长，尽量在一小时内上机。

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实验设计

流式的对照一直很令人头疼，空白管、阴性管、单阳管、阳性管都是啥意思？它们的目的是什么？每一次实验都需要做吗？别急ÿ