速率法和终点法的区别_生化检验中，什么是终点法？（附生化反应曲线解析）...

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我们在使用生化仪的时候，生化分析仪的参数上的检测方法可能存在多个，包括终点法、固定时间法(两点法)、连续监测法(速率法)、双波长法等等，这些检测方法有什么不同，各有什么作用呢？

生化分析仪是用于检测人体肝功、肾功、血糖、血脂、心肌酶、离子等项目的仪器，是现在临床上肝、肾、心血管疾病等疾病的必备检测设备。现在临床上的检测设备多种多样，其中检测原理和方法也不尽相同，其主要的目的是用于检测疾病的严重程度和相关疾病的潜在风险。虽然有些检测原理不同，但是这些产品的目的却是一样的，只是在检测结果方面存在一定的差异性，具体什么样的测试原理的仪器更准确，需要用测试结果加以说明了。

在日常检验工作中，如果校准失败了、质控失控了、标本测值“你认为不准确”了，我们有很多途径去查找原因，其中查看反应曲线就是方法之一，而要想看懂和真正了解反应曲线，那么一定要了解生化检测所采用的分析方法。

目前，常用的分析方法主要分为两大类：终点法和速率法，其中终点法细分为一点终点法和两点终点法，速率法细分为速率法A和两点速率法，本期内容通过实例来讲解终点法，进而认识反应曲线。

终点法定义：指经过一段时间(一般为几分钟)的反应，反应进行到完全，使全部底物(被测物)转变成产物，反应液的吸光度不再增加(或降低)，吸光度的增加(或降低)程度与被测定物的浓度成正比，称为终点法，更确切地应称平衡法，这是最理想的分析类型。

终点法实例1(一点终点法)

如TP(总蛋白)项目，样本与双缩脲试剂发生反应，样本中蛋白的肽键与铜离子形成蓝紫色螯合物，通过测定吸光度来求得样品中总蛋白的浓度。

如下图为日立7180全自动生化分析仪反应曲线，其中横坐标表示时间(以测光点表示，10min共记录34次吸光度)，纵坐标为吸光度(蓝紫色吸光度)，反应模式是先加入样品，再加入R1试剂，开始测光(约每18S记录一次吸光度)，由于样本中的总蛋白和双缩脲试剂反应生成蓝紫色螯合物，吸光度上升，通过测定终点的吸光度(如反应曲线紫色区域显示)计算样本中总蛋白的浓度。

图为日立7180全自动生化分析仪图片

采用一点终点法项目(一般单试剂)如：

ALB、TP、CO2(单试剂)、GLU(单)等。

终点法实例2(两点终点法，一般双试剂)

如下图：先加入样本，再加入R1试剂，37度温浴5min(该过程除内源性干扰，如抗坏血酸)，取吸光度A1(如下图15和16点吸光度)，加入R2试剂启动反应，胆固醇最终转化为有色物质，吸光度上升，取吸光度A2(如下图33和34点吸光度)，通过A2-A1的吸光度差用于计算血清中胆固醇的浓度。

图为日立7180全自动生化分析仪图片

采用两点终点法项目(一般双试剂)如：

GLU、HbA1c、TC、TG、CRE、UA、HDL、LDL、比浊法项目(CYSC、B2MG、IgA、IgG等)等。

常见的全自动生化分析仪检测方法有：终点法、动力学法、免疫比浊法、固定时间法、双试剂法等，具体是什么意思呢？下面我们来做简单介绍，不求深入研究，只求有所了解和区别。

终点法：在反应到达终点，即在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时，选择一个终点吸光度值，用于计算结果。结果计算公式：待测物浓度CU=(待测吸光度AU－试剂空白吸光度AB)×K。K为校准系数。

动力学法(即连续监测法，速率法)：是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取时间-吸光度曲线中线性期(各两点间吸光度差值相等)的吸光度值，并以此线性期的单位吸光度变化值计算结果。

免疫比浊法：当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。

固定时间法(两点法)：指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点，此两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光度，这两点的吸光度差值用于结果计算，有时也称此法为两点法。计算公式为：CU=(A2-A1)×K。

液体单试剂：将某种生化检验项目所用到的试剂科学地混合在一起，组合成一种试剂。应用时只需将检测标本和试剂按照一定比例混合，即可进行相应的生化反应，然后再采用适当方法检测结果。

液体双试剂：将某些生化检测项目所用到的试剂，按照用途科学地分成两类，分别配成两种试剂。通常第一种试剂加入后，可起到全部或部分消除某些内源干扰的作用。第二试剂为启动被检测物质反应的试剂。两种试剂混合后才共同完成被检测项目的生化反应，然后用适当方法检测结果。

单试剂存在抗干扰能力差的特点，会带来分析误差。而双试剂准确性较高，消除了样品的内源性干扰，在终点法测试中，能消除样品空白(脂浊、溶血、黄疸等干扰物质)、比色杯等因素的影响，提高了测定的准确性，并且试剂稳定：试剂1(R1)、试剂2(R2)分开保存，提高了试剂的稳定性。

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来源：检验医学基地

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